灵芝多糖的研究摘要:灵芝多糖是灵芝中的主要冇效成分。本研究对灵芝多糖的分离和纯化方法作了阐述，对其化学结构作了初步分析，并且对工业发酵方法生产的三种灵芝菌粉与相应的野生或栽培的灵芝子实体进行了灵芝多糖含量方面的比较从而说明，利用现代发酵技术生产灵芝菌粉将很有希望成为以后生产灵芝的一种主要方法。关键词：灵芝多糖;发酵灵芝菌粉;野生灵芝;栽培灵芝中图分类号：S567.3+1文献标识码：A引言灵芝的概述灵芝隶属于真菌界，担子菌纲，无褶菌目，猴椅菌科，万年茸(灵芝)属。学名为Ganodermafucldlum(Fr.)Karsto它是观赏、医药兼用的菌类。山于整个菇体木化，可长久保存不腐败，故有〃万年菌〃Z称。1.灵芝的保健作用灵芝是我国传统的扶正固本，滋补强壮的中药，历代医书均将之列为中药上品。早在2千多年前的春秋战国时期《列子，汤问》列御寇中云“朽壤之一，有菌之者”，并总结当时利于灵芝治病保健的经验：“煮百沸其味清芳，饮之明目,脑清，心静，肾坚，其宝物也”。［1］最早的医学著作《神农草经》把灵芝列为上品，谓其“久味苦平，主治中结，益心气，补中，增智慧，不忘，久服轻身不老”。李时珍的《本草纲冃》中对灵芝药性和功效作了详尽的记述:赤芝，苦平无毒，主治中结,益心气，补中，增智慧，不忘；紫芝，甘温无毒，好颜色，治虚虏，治痔。[2]现代药理和临床研究证明，灵芝中迄今已分离到150余种化合物，但多数药理活性与灵芝多糖有关。活性多糖是一种具有某些特殊生理功能的多糖类高分子化合物，广泛存在于植物，动物和微生物组织中。近年来，多糖结构与功能的关系以及多糖复合物疫苗等研究在国际上受到了较多关注。灵芝多糖主要以下生理功能：（1）调节免疫功能（2）抗肿瘤作用（3）促进体内核酸与蛋白质的代谢（4）抗氧自由基作用（5）灵芝多糖有镇定作用，强心作用和提高实验动物耐受常压缺氧的能力等其他功能2.实验的材料和方法2.1材料泰山赤芝T-1,韩国灵芝K-1,口本灵芝J-1•三种灵芝菌种均为山东莱芜农科所保存品种。2.2发酵培养基釆用当前灵芝发酵行业最常用的发酵培养基配方之一：蔗糖4%,KH2P040.15%,MgS04*7H200.075%,（NH4）2S040.05%,CaCO30.1%,消泡剂适量。2.3试剂乙醇，葡萄糖，蔥酮，乙酸乙酯，浓硫酸等。2.4仪器德国贝朗公司所生产的Biostat-MD型10L全自动发酵罐。722G可见分光光度计及其它实验室常用小仪器。2.5实验方法2.5.1灵芝菌丝体的培养过程将新培养的斜面母种转入种子培养基，28度培养7天，镜检无杂菌后,按5%的量接种到发酵罐内，发酵5~6人，发酵液残糖在1%左右结束培养。2.5.2灵芝多糖的分离和纯化2.5.2.1清液胞外多糖的提取工艺流程：发酵液离心发酵上清液浓缩浓缩液透析透析液浓缩浓缩液离心上清液乙醇沉淀沉淀物干燥胞外粗多糖2.5.2.2菌丝体胞内多糖的提取工艺流程：工艺流程：发酵液离心发酵上清液浓缩浓缩液透析透析液浓缩浓缩液离心上清液乙醇沉淀沉淀物丁燥胞外粗多糖2.5.2.3粗多糖的纯化工艺流程：粗多糖脱蛋白脱蛋白多糖层析洗脱含糖部分层析洗脱多糖纯品2.6分析方法2.6.1多糖的纯度鉴定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤法进行检查纯度。2.6.2灵芝多糖含量的测定方法:2.6.2.1标准曲线的制备:准确配制0.1000%葡萄糖储备液及0.2000蔥酮-已酸已脂显色剂。分别取1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml储备液,用水分别定容至25ml后，在分别取0.50ml,加入干燥的10ml具塞试管中,在加入4.00ml浓硫酸，摇匀。5min后加1.00ml显色剂,100°C水浴加热lOmin,取出，冷却至室温后，以浓硫酸为空白对照，722G可见分光光度计在600nm处，测吸光度值，计算其标准曲线回归方程。2.6.2.2换算因素的测定：纯灵芝多糖样品从日本获得。精确称取60.Omg,水溶解后定容至100ml,取4.00ml水定容至10ml。得多糖供试液，精确称取0.50ml,按（1）中方法显色，测定吸光度值，代入标准回归方程求出供试液的葡萄糖含量，以f二W1/W2计算因素f（Wl为供试液中多糖实际重量，W2为测定出的糖含量）。2.6.2.3样品溶液的制备：取待测样品适量，80%乙醇回流4h,过滤,滤渣用水回流2h。合并两次滤液，滤液冷却至室温后定容至100ml,取30ml,用水定容至10ml,得样品溶液。2.6.2.4多糖含量测...