内科学(心血管病)专业优秀论文不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞电生理作用及对心肌和血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响关键词：钙通道阻滞剂氨氯地平离子通道平滑肌细胞心室肌细胞电生理作用钙离子浓度心血管疾病摘要：目的：氨氯地平（Aml）是临床上常用的二氢吡啶类钙通道阻滞剂，广泛应用于心血管疾病的治疗。Aml分左旋、右旋和消旋Aml，但不同旋体Aml作用机理尚不清楚，本研究拟采用膜片技术和细胞内钙离子浓度荧光测定技术探讨不同旋体Aml对大鼠心室肌细胞静息电位（RP）、动作电位（AP）、离子流及心室肌和平滑肌细胞内钙离子浓度的影响，从细胞、分子和离子水平研究不同旋体Aml的作用机理，为临床准确合理使用不同旋体Aml提供理论依据。方法：（1）采用“四步”酶消化法，即无钙台氏液灌流、50μmol/L低钙酶液灌流、200μmol/L低钙台氏液灌流和室温下KB液中孵育。分离大鼠心室肌细胞后，记录正常大鼠心室肌细胞RP、AP、钠离子电流（INa）、L—型钙离子电流（ICa—L）、瞬时外向钾离子电流（Ito）、延迟整流性钾离子电流（Ik）和内向整流性钾离子电流（Ik1）。分别加入0.1、0.5、1、5和10μmol/L左旋、右旋和消旋Aml，观察不同浓度下不同旋体Aml对RP、AP、INa、ICa—L、Ito、Ik和Ik1影响。（2）酶消化法分离大鼠心室肌细胞后，采用荧光探针Fura—2/AM测定心室细胞内钙离子浓度，然后分别加入1、5、10、50和100μmol/L左旋、右旋和消旋Aml，观察不同浓度下不同旋体Aml对心室肌细胞内钙离子浓度的影响。（3）采用“两步”酶消化法，即先以酶液Ⅰ消化30分钟左右，再以酶液Ⅱ消化15分钟左右。分离大鼠胸腹主动脉平滑肌后，使用荧光探针Fura—2/AM测定平滑肌细胞内钙离子浓度，然后分别加入0.1、0.5、1、5和10μmol/L左旋、右旋和消旋Aml，观察不同浓度下不同旋体Aml对平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。结果：（1）大鼠心室肌细胞分离：在分离过程中如整个心脏保持红润，则细胞数量在90%以上，KB液中孵育后耐钙心肌细胞在70%左右；在分离过程中心脏局部保持红润部位的细胞数量在80%以上，耐钙细胞在60%左右，而苍白区细胞数量变异较大，但一般均在50%以下，且耐钙细胞较少；在分离过程中如整个心脏始终苍白，则细胞数量不仅低于30%，且几乎没有耐钙细胞。（2）正常大鼠心室肌细胞RP、AP和离子流：a.外膜、中膜和内膜心室肌细胞RP分别为—75.8±9.5mV（n=87）、—76.3±8.4mV（n=75）和—75.4±7.8mV（n=68），差异无显著性（P>0.05）。b.外膜25%、50%和90%动作电位时程（APD）分别为3.6±1.2ms、10.3±2.1ms和46.3±4.8ms（n=50）；中膜APD25、APD50和APD90分别为6.4±1.8ms、14.7±2.4ms和69.4±8.3ms（n=58）；内膜APD25、APD50和APD90分别为13.8±2.1ms、45.3±10.2ms和152.1±33.4ms（n=62），外膜、中膜和内膜心室肌细胞APD差异有显著性（P<0.05）。c.外膜、中膜和内膜Ito峰值电流和电流密度不同，在+70mV刺激时电流大小分别为8925.0±2399.3pA（n=57）、4373.1±830.2pA（n=51）和1843.3±542.4pA（n=60），相应电流密度分别为59.50±15.99pA/pF、29.15±5.53pA/pF和12.29±3.62pA/pF，差异有显著性（P<0.05），但外膜、中膜和内膜心室肌细胞Ito半激活电压、半失活电压及失活后恢复时间均无差异（P>0.05，n=6～8）。d.外膜、中膜和内膜INa、ICa—L、Ik和Ik1峰值电流、电流密度、电流电压（I—V）曲线形态、稳态激活曲线、稳态失活曲线和失活后恢复曲线无差别（P>0.05，n=6～10）。（3）氨氯地平对心室肌细胞RP、AP和离子流影响：a.加入0.1、0.5、1、5和10μmol/L左旋、右旋和消旋Aml后，RP、AP最大上升速率、AP幅度和AP超射差异无显著性（P>0.05，n=8～10），但加入上述浓度左旋Aml后，APD25分别为11.0±1.7ms、10.4±1.6ms、9.2±1.4ms、6.9±1.0ms和4.6±0.7ms（P<0.05，n=12）；APD50分别为36.2±8.2ms、33.9±7.7ms、30.2±6.8ms、22.6±5.1ms和15.1±3.4ms（P<0.05，n=12）；APD90分别为121.6±26.7ms、114.0±25.0ms、101.4±22.2ms、76.1±16.7ms和50.7±11.1ms（P<0.05，n=7）。加入上述浓度消旋Aml后，APD25分别为12.4±1.9ms、10.6±1.6ms、9.8±1.5ms、8.0±1.2ms...