Notchl>Jagged1在肝细胞癌组织中的表达及临床意［摘要］目的探讨Notchl、Jaggedl在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法选择2010年3月〜2012年6月手术治疗并经病理证实为肝细胞癌的患者35例，每例患者均取癌组织及癌旁组织(距癌组织2~3cm处)，其中肝细胞癌组织35例，癌旁肝硬化组织13例，癌旁正常肝•组织22例。釆用实时荧光定量PCR法检测NotchlmRNA、Jagged1mRNA在肝细胞癌组织、癌旁肝硬化组织及癌旁正常肝组织中的表达；免疫组织化学染色法检测Notchl、Jaggedl蛋白的表达，并分析两种蛋白的表达与肝细胞癌临床病理特征的关系。结果①肝细胞癌组织中NotchlmRNA、JaggedlmRNA的表达分别为(4・58±0.77)、(4.96±0.87),显著高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义(P0.05)。②肝细胞癌组织中,Notchl.Jaggedl的阳性表达率分别为71.4%(25/35)、68.6%(24/35)；癌旁正常肝组织中,NotchKJaggedl的阳性表达率分别为36.4%(8/22)、40.9%(9/22)；癌旁肝硬化组织中，Notchl、Jaggedl的阳性表达率分别为30.8%(4/13)、30.8%(4/13)oNotchl、Jaggedl的阳性表达率在肝细胞癌组织中明显高于癌旁正常肝组织(x2Wtchl二6.81,x2Jaggedl二4.24,P0.05)。Spearman相关分析显示，肝细胞癌组织中Notchl的表达与Jaggedl的表达呈正相关二0.38,P0.05)；与有无淋巴结转移、病理分级密切相关。有淋巴结转移者Notchl.Jaggedl阳性表达率高于无淋巴结转移者；低分化癌组织Notchl.Jaggedl的阳性表达率明显高于中高分化癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)o结论Notch信号通路中Notchl.Jaggedl对肝细胞癌的发生发展起促进作用，可为判断临床预后提供参考价值。［关键词］肝细胞癌；Notch信号；实时荧光定量卩CR；免疫组化［］R735.7［文献标识码］A［］1673-7210(2013)07(a)-0004-04Notch信号通路在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。Notchl.Jagged1是该信号通路中重要的受体和配体。原发性肝癌是临床最常见恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌占90%以上，木研究采用免疫组化S卩法检测Notchl.Jagged1蛋白在肝细胞癌组织中的表达，实时荧光定量PCR法检测NotchlmRNA、JaggedlmRNA的表达,并分析Notch信号与肝细胞癌临床病理特征的关系，以期为肝癌的临床治疗提供有价值的实验依据。1材料与方法1.1标本选择2010年3月〜2012年6月手术治疗并经病理证实为肝细胞癌的患者35例，每例患者均取癌组织及癌旁肝组织(距癌组织2~3cm处)。其中，男22例，女13例，平均年龄(53.2±11.1)岁;低分化癌15例,中、高分化癌20例；癌旁组织中正常肝组织22例，肝硬化组织13例。每份标木取部分组织液氮速冻后-80°C保存备用。英余组织4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，4卩m厚连续切片。1.2主要试剂RNA提取试剂盒RNAprepCellKit购自北京TTANGEN公司,AMV第一链cDNA合成试剂盒购自上海生工生物工程公司、SYBRGreensupermix购自BIO-RAD公司、扩增引物由上海赛百盛生物技术有限公司合成。山羊抗人Notchl多克隆抗体、Jagged1多克隆抗体为SantaCruzBiotechnology公司产品；免疫组织化学S卩试剂盒，二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购口武汉博士德公司；1・3实验方法1.3.1实时荧光定量PCR每份标本取100mg组织，按RNA提取试剂盒提取总RNA,2%琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪鉴定RNA完整性和纯度。A260/A280值在1.8-2.0之间符合要求。取2ugRNA样品，Oligo(dT)18作为引物，重组鼠白血病毒逆转录酶(MMLV)逆转录合成cDNA。实时荧光定量PCR反应体系：SYBRGreensupermix10PL,上、下游引物各0.5uL,cDNA样品1uL,dH208uL,共计20uL。反应条件：预变性95°C15s,1个循环；PCR反应，95°C15s,60°C30s,45个循环；熔解曲线分析，95°C1min,1个循环，55°Clmin,1个循环，95°C30s,81个循环。Notchl基因引物序列：上游5'-GGACTGTGCGGAGCATGTACC-3',下游5'-TTGTCGTCCATGAGGGCACCG-3',扩增产物750bp；Jagged1基因引物序列:±游-CTCATCAGCCGTGTCTCAAC-3,,下游-GGCACACACACTTAAATCCG-3,,扩增产物297bp；内参基因引物P-action:上游5'-GGCGGCACCACCATGTACCCT-3',下游5'-AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3',扩增产物202bpo采用2-分析法。每样品平行3管。［参考文献］[1]SimonsMP,MooreJM,KempTJ,etal.Identificati...