Caspase-1在2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化中的作用

Caspase-1在2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化中的作用作者单位:荆州市中心医院(长江大学第二临床医学院)检验科434020;DOI:10.7504/nk2016010203中图分类号:R587.1文献标识码:A摘要:目的调查Caspase-1mRNA在2型糖尿病(T2DM)合并颈动脉粥样硬化(CAS)中的表达水平,并探讨它与斑块之间的关系。方法收集健康对照者组35例、T2DM组26例、T2DM+CAS组81例(包括IMT增厚组与斑块组)、CAS组35例,采用实时荧光聚合酶联反应(RT-FQ-PCR)法检测各组外周血单个核细胞(PBMCs)中Caspase-1mRNA的表达水平,比较各组间差异,并分析斑块组caspase-1mRNA的表达量与crouse积分相关性。结果T2DM组与T2DM+CAS组PBMCs中Caspase-1mRNA的表达量显著高于对照组(P<0.05);IMT增厚组Caspase-1mRNA的表达量明显高于斑块组(P<0.01);斑块组中患者Caspase-1mRNA的表达量与斑块crouse积分呈明显负相关(「=-0.467)。结论Caspase-1参与了2型糖尿病和动脉粥样硬化疾病的发展,而且在斑块形成早期表达更为活跃。关键词:Caspase-1;2型糖尿病;动脉粥样硬化;IMT;crouse积分;Caspase-1也称为IL-l&beta;转换酶(ICE),属于半胱氨酸蛋白酶家族中的一员,这种半胱氨酸蛋白酶可特异性识别底物P1位点的天冬氨酸残基,通过切割IL-l&beta;、IL-18和IL-33的前体,在炎症反应中发挥着重要作用[1]。而2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)和动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的发生发展都伴随着炎症反应,那么Caspase-1在这两种疾病中的作用如何?木文将通过调查Caspase-1mRNA在.相关人群外周血单核细胞的表达量来对其进行探讨。1.材料和方法1.1研究对象根据颈动脉超声、血糖等相关结果,将收集于我院的177名受试者分为健康对照者组35例、单纯2型糖尿病组26例(T2DM)、2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化组81例(T2DM+CAS)、单纯颈动脉粥样硬化组35例(CAS),T2DM+CAS中包括IMT增厚组37例与斑块组44例。患者除符合诊断标准外,无cryopyrin相关周期热综合征、痛风、阿尔茨海默症。所奋相关检查均经受试者同意。1.2主要仪器与试剂DXC800全自动生化分析仪(美国Beckman公司);ABI7300荧光定量PCR仪(美国ABI公司);IE33多普勒彩色超声诊断仪(荷兰Philips公司);trizon试剂(美国Lifetechnologies公司),批号:14105;HIFI-MMLVcDNA第一链合成试剂盒及GoldStarTaqManMixture试剂盒(北京康为世纪生物科技宵限公司),批号:00021405和00051310;血糖试剂(美国Beckman公司),批号:411207。1.3引物的设计与合成根据GeneBang中人类Caspase-1和&beta;-actin基因序列,使用primerexpressv2.0设计引物及探针,由美国lifetechnologies公司合成,Caspase-1上游:AATTTTCCGCAAGGTTCGATT,下游:ACTCTTTCAGTGGTGGGCATCT,探针:5*-(FAM)TCATTTGAGCAGCCAGATGGTAGAGCG(DAB)-3*,&beta;-actin上游:5'-GCTGTCTGCCTTGGTAGTGGAT-3\下游:5,-GCATCGTCACCACCAAAGC-3,,探针:5'-(FAM)ATGGGTCAGGGATGTGCAAGGCA(DAB)-3'o1.4方法1.4.1所冇受试者均测量外周血单核细胞数、血清空腹血糖(FBG)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度胆固醇(HDL)、低密度胆固醇(LDL),同吋收集性别、年龄、高血压史、吸烟史等资料。CAS斑块的超声检测嘱受试者平卧采用彩色超声诊断仪选10MHz线阵探头扫描双侧颈总动脉、颈总动脉分叉及颈内外动脉。①若有斑块,记录各个独立斑块的厚度,并将所测得的所有独立斑块厚度相加作为Crouse积分[2];②若未见斑块,选取颈总动脉距窦部10mm处测量内膜-中膜层厚度(IntimaMediaThickness,IMT),1.0mm&le;IMT&le;1.5mm者归入IMT增厚组,IMT>1.5mm者归入斑块组。Caspase-1的检测(1)总RNA提取与逆转录每2ml全血加2ml生理盐水混匀后加2ml淋巴细胞分离液,取外周血单个核细胞,按Trizol试剂盒说明提取总RNA,20&mu;lDEPC水溶解,通过OD260/OD280鉴定RNA的纯度,琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的质量,均合格后按试剂盒进行逆转录反应,20&mu;l反应体系:dNTPMix4&mu;LPrimerMix2&mu;l、5&times;RTBuffer4&mu;LDTT2&mu;l、HIFI-MMLVl&mu;LRNase-freewater2&mu;L模板5&mu;L反应条件:42°C50min、85°C5min。产物-20°C保...

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