哺乳动物细胞培养生产流感疫苗摘要动物细胞培养是模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的一门技术。动物细胞培养是现代生物制药的重要技术之一，不仅可以通过直接培养动物细胞制备相关药用产品，而且还可以将动物细胞作为宿主细胞表达生产原核细胞所不能生产的药用物质。对于许多人用和兽用的重要蛋白质药物和疫苗，尤其是那些相对分子质量较大、结构较复杂或糖基化的蛋白质来说，动物细胞培养是首选的生产方式。传统的流感疫苗生产多采用鸡胚培养，但该生产过程易受微生物污染、内毒素残余量高、对流感大流行应急能力差，因此基于哺乳动物细胞培养的病毒疫苗工业的发展变得尤为重要。本文重点是MDCK细胞生产流感疫苗的研究以及临床应用现状。研究背景动物细胞培养是在动物组织培养基础上发展起来的，起源于19世纪的某些胚胎学技术，奠基人是美国生物学家哈里森(Harrison)。1907年，哈里森采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，使细胞存活了几周时间，并观察到细胞突起的生长过程，开创了动物组织培养的先河。法国学者卡雷尔(Carrel)设计的卡氏培养瓶1923年用于培养鸡胚的心肌组织取得成功，极大地推动了动物细胞培养技术的建立。流行性感冒(以下简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其临床特征是全身不适症状比一般感冒厉害，能引起心肌炎、肺炎和支气管炎等多种并发症，而且可以侵犯所有的年龄层。由于流感病毒具有高度传染性，能在短期迅速蔓延，造成不同程度的流行，甚至世界范围内的大流行。20世纪，甲型流感病毒曾引起过4次全球流行，1918－1919年的西班牙流感(H1N1)，历时18个月，导致二千万至四千万人死亡，是历史上最严重的一次流感暴发。进入21世纪，禽流感成为危害世界养禽业发展的重要因素。2004年至今，由甲型H5N1流感病毒引起的禽流感病毒肆虐全球多个国家和地区，并且由染病禽类传染到人，累计造成250多人死亡。世界卫生组织数据显示，每年有5%～15%的人会感染季节性流感，重症病例达三百万至五百万。抗病毒药物常用作抵抗流感的应急药物。目前，获准用于流感病毒感染治疗的四种药物：金刚胺和金刚乙胺通过干扰病毒颗粒M2蛋白离子通道功能间接抑制病毒复制；扎那米韦和奥赛米韦是神经氨酸酶抑制剂，可以阻止病毒从细胞膜上正常释放。这些药物可以有效抑制流感病毒，但因其可能对人体产生不良反应及可能诱导耐药等缺点，面对大范围长时间的流感大流行，药物往往也---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---无能为力。目前，接种流感疫苗被认为是预防流感发生与传播的最佳方式，可有效减少季节性和大流行性流感对公众健康的影响。因此，病毒疫苗的生产受到广泛关注。现有4种类型的疫苗应用于预防流感、全病毒疫苗、裂解病毒疫苗和病毒亚单位疫苗，另外还有冷适应流感活病毒疫苗。全病毒流感疫苗的副作用较大，在国外已经不再使用，国内也正逐渐被取代。目前已上市的流感疫苗基本都是使用鸡胚培养制备，国内外使用鸡胚培养疫苗已经有50年历史。由于鸡胚生产流感疫苗需要消耗大量的SPF级的鸡胚，鸡胚带有潜在的污染可能，而且培养周期过长，不易于控制产量，不利于应对大规模的流感爆发。为此，世界卫生组织、美国政府等都鼓励发展细胞培养技术替代目前的鸡胚培养技术来生产流感疫苗。在诸多的后续产品中，最值得期待的还是使用细胞培养的流感疫苗。1.流感疫苗的生产方法1.1鸡胚培养法自1933年鸡胚培养流感疫苗获得成功以来，鸡胚培养法成为大量获得流感疫苗的主要手段。半个世纪以来，流感疫苗一直在受精鸡蛋(鸡胚)中培育，现已上市的疫苗大都使用鸡胚培养法制备。在生产疫苗的过程中，鸡胚主要用作培养介质，是病毒生长所需的特殊环境。由于疫苗生产工序要求严格，合格的鸡胚除了保证病毒存活外，还应是健康鸡群的受精卵，一般要求产蛋鸡的年龄不超过1周岁；同时，鸡群必须经过定期检测，确保在生长过程中没有任何禽流感等相关疾病；受精卵内也不能存在任何病毒。因此就难免会遇到一些问题，例如：一方面，对鸡蛋要求严格，不是每只鸡蛋都可以用来生产疫苗，只有经过...