神经病学专业优秀论文阻断腺苷A<,2A>受体对小鼠大脑中动脉局灶缺血性损伤的影响关键词：腺苷A2A受体基因敲除大脑中动脉局灶缺血脑卒中神经保护剂脑损伤保护摘要：背景：卒中是导致人类死亡的主要疾病之一，是疾病致残的首位病因。缺血性卒中是卒中的主要类型。尽管国内外学者进行了大量的研究，目前仍无肯定有效的神经保护剂投入临床治疗缺血性卒中，迫切需要探索新的神经保护途径。腺苷是中枢神经系统重要的神经调质，目前已克隆出4种腺苷特异性受体亚型，即A1、A2A.A2B及A3受体。腺苷参与调节脑内重要的生理功能。腺苷活动异常与某些神经系统疾病的发生和发展有关，对其干预可能阻止或逆转疾病过程。以往动物实验发现腺苷A2A受体拮抗剂对神经元缺血性损伤具有保护作用，但确切的作用环节和机制仍不明确，有必要进一步探讨。众所周知，在急性脑缺血发生后，缺血性脑损害的发展将经历多个阶段，其中主要包括急性期损害、再灌注损害和脑水肿。脑缺血数分钟后，随着细胞能量耗竭，引起细胞酸中毒、细胞膜功能和结构损害，发生早期神经损伤。脑缺血诱发脑内谷氨酸过度释放，谷氨酸通过激活NMDA受体使细胞外钙离子内流，并促进细胞内储存钙释放，导致细胞内游离钙增加，由此激活细胞内脂酶和蛋白酶，破坏细胞骨架结构，并引发系列信号级联反应。研究证实，位于谷氨酸能神经元突触前的A2A受体被激活后，可以促进谷氨酸的释放。因此，推测脑缺血后腺苷A2A受体的激活可能由于促进谷氨酸的释放而加重了钙超载。再灌注后随着组织血流恢复，大量氧自由基产生，炎性介质表达增加，造成细胞膜结构损伤和DNA断裂，多种机制共同作用引起再灌注损伤、血脑屏障破坏和脑水肿形成。脑水肿是脑缺血后再灌注损伤的重要病理环节，可引起和加重迟发性神经元损伤。实验发现，水通道蛋白4(Aquaporin，AQP4)在缺血性卒中后表达增高，与脑水肿形成一致。研究证实，位于血管内皮细胞和平滑肌细胞的A2A受体被激活后能扩张脑血管。由此推测脑缺血后再灌注阶段A2A受体的激活可能由于扩张脑血管而加重脑水肿。尽管以往动物实验研究发现阻断腺苷A2A受体能够减轻缺血性脑损伤，但由于对组织病理损害的观察时点仅限于再灌注后，也无对脑水肿影响的研究报道，因此难以清楚解释阻断腺苷A2A受体减轻缺血性脑损伤的可能作用环节和机制。因此有必要进一步探讨阻断A2A受体对脑缺血后不同时相、不同类型病理损伤的影响。目的：本研究利用腺苷A2A受体基因敲除小鼠建立大脑中动脉缺血/再灌注模型，针对急性缺血性脑损伤不同时相和病理损伤类型，初步探讨阻断A2A受体对于缺血性脑损伤保护效应的作用环节，期望为解释其保护作用机制提供线索。方法：1.腺苷A2A受体基因敲除(A2ARKO)小鼠及同窝野生型(A2ARWT)小鼠各分为脑缺血2h组、脑缺血后再灌注22h组和脑缺血后再灌注46h组。2.线栓法制作大脑中动脉阻塞模型。3.脑组织切片甲酚紫染色结合图象分析技术测定脑梗死体积。4.干湿重法测定脑组织含水量。5.免疫组化染色检测钙结合蛋白(CalbindinD-28k，CB)和水通道蛋白4。结果：1.在脑缺血2h、脑缺血后再灌注22h和脑缺血后再灌注46h，测定A2ARKO组的脑梗死体积均显著小于A2ARWT组的梗死体积(P<0.01)2.光镜下见钙结合蛋白免疫反应阳性物质位于神经元细胞浆，免疫反应阳性细胞主要分布于海马和皮质，在梗死灶周边区计数阳性细胞并做组间比较。脑缺血2h，与假手术组比较，A2ARWT组钙结合蛋白免疫反应阳---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---性细胞显著较少(P<O.Ol)，而A2ARKO组无显著差异(P>0.05)。脑缺血后再灌注22h和46h，与假手术组比较，A2ARKO组和A2ARWT组钙结合蛋白免疫反应阳性细胞均显著较少(P<0.05，P<0.01)。在脑缺血后各时点的比较，A2ARKO组钙结合蛋白免疫反应阳性细胞均显著多于A2ARWT组(P<0.01)。A2ARKO组和A2ARWT组，在缺血2h与再灌注22h时点比较无显著差异(P>0.05)；与缺血2h及再灌注22h时点比较，再灌注46h时点钙结合蛋白免疫反应阳性细胞显著减少(P<0.01)3.光镜下见AQP4免疫反应阳性物质位于细胞膜下，主要表达于星形胶质细胞，也见于血管内皮细胞和室管膜细胞，梗死灶周...