IN-1以及联合NT-3对大鼠脊髓损伤后NF表达变化的影响及意义【摘要】目的探讨大鼠脊髓损伤后给予髓磷脂相关生长阻逆蛋白抗体(IN-1)以及和神经营养素3(NT-3)联合作用后神经元中丝蛋白（neurofilaments,NF）的表达有无变化。方法健康Sprague-Dawley（SD）大鼠18只，平均随机分为损伤对照组、IN-1组及IN-1和NT-3联合作用组。各组分别在术后28天取材行HE染色、免疫组化染色检测NF表达的变化。结果联合组NF染色灰度值明显小于其他两组（P《0.05或P《0.01）。结论IN-1及联合应用NT-3后可以促进脊髓损伤后轴突的再生，促进运动功能的恢复。【关键词】脊髓损伤髓磷脂相关生长阻逆蛋白抗体神经营养因子3神经元中丝蛋白Abstract:ObjectiveToobservethechangesofneurofilements(NF)inratswithspinalcordinjuryaftertreatedwithmyelin-associatedgrowthinhibitorNogo-A(IN-1)andincombinationwithneurotrophin3(NT-3).Methods18healthySprague-Dawley(SD)ratswererandomlyallocatedtoinjuredcontrolgroup,IN-1group,IN-1combinedwithNT-3group.28daysafteroperation,sampleswerecollectedeachgroup.AnHEstainingandanimmuno-histochemicalstainingwereperformedtoobservethechangesofNF.ResultsInIN-1combinedwithNT-3group,thegrayvalueofNFwaslowerthantheothertwogroups(P《0.05orP《0.01).ConclusionIN-1andIN-1combinedwithNT-3resultsinincreasedregenerativesproutingandgrowthoflesionedspinalcordaxonsandenhancedrehabilitationofmotorfunction.Keywords:spinalcordinjuries;myelin-associatedgrowthinhibitorNogo-A;neurotrophin3;neurofilament脊髓损伤是世界性的医学难题，国内外学者进行了大量的研究，试图通过各种方法来减轻脊髓的损伤，促进脊髓损伤的修复及神经功能的恢复。目前研究较多的是通过一定的干预手段，观察脊髓损伤的修复情况，而神经元中丝蛋白（NF）可以从侧面反映脊髓损伤后轴突再生的情况。本实验通过给予髓磷脂相关生长阻逆蛋白抗体（IN-1）及联合应用神经营养素3（NT-3），观察大鼠脊髓损伤后NF表达的变化，探讨二者对脊髓损伤修复的影响。1材料与方法1.1主要试剂NT-3购自美国PeprotechEC公司，IN-1购自美国Santa公司，NF一抗、NF免疫组化试剂盒购自美国Sigma公司。---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.2实验动物及分组清洁型SD大鼠18只（由中南大学实验动物部提供）,雌雄不限，体重250～300g，随机分为手术对照组(n=6)、IN-1组（n=6）及IN-1和NT-3联合作用组(以下简称联合组，n=6)。1.3动物模型的制作所有动物首先采用改良Yaksh法［1］，后正中切开大鼠颈背侧皮肤，沿中线分离肌肉，暴露寰枕膜，用尖刀小心切开寰枕膜、硬脊膜和蛛网膜，直到有清亮脑脊液流出为止，然后将外径0.61mm的PE-10聚乙烯导管经枕骨大孔顺行插入蛛网膜下腔6.0～6.5cm，达T8上缘水平，依次缝合软组织，将导管牢固固定在伤口周围皮肤。所有动物在麻醉清醒后饲养3天，确定无后肢功能障碍者纳入实验组。参照Brosamle等［2］方法制作脊髓半横断模型，采用水合氯醛（0.3ml/100g）腹腔注射麻醉。用剪刀剪掉背发，取俯卧位，消毒铺巾，以T8棘突为中心，做长约2cm的纵行切口，显露T7至T9棘突和椎板，在手术显微镜下小心咬除T7～9棘突及椎板，剪开硬脊膜，在相当于T8椎板水平用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的后2/3，深度为1.5mm，再用做好标记的11号刀片的尖端部分在损伤的脊髓处来回划动１次，以确保可靠的切割。其中手术对照组通过置管每天注入生理盐水30μl，而IN-1组每天用微量进样器注入IN-124μl(0.6μg/μl)，联合组每天注入IN-124μl(0.6μg/μl)和NT-33μl(1μg/μl)。每天分为早、中、晚３次注射，每次注射完毕后用10μl生理盐水冲管，以保证药物进入蛛网膜下腔，每组连续使用1周。术后人工挤压膀胱排尿，每天3次，直至形成排尿反射。1.4标本的收集和处理所有动物均分别于术后28天用4％多聚甲醛/0.1mol/LPBS经左心室—主动脉灌注后取出脊髓组织，灌注液中固定12h左右，然后放入30％蔗糖溶液中，待组织沉底在开放冰冻切片机上切片，厚度30...