高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定法及技术要求『摘要』：近些年来，国内外相继研制开发出一些新型高、低密度脂蛋白胆固醇（HDL-C/LDL-C）HDL-C、LDL-C的直接匀相测定法（homogeneousmethods）试剂。如测定HDL-C用的选择性抑制法（PPD法），PEG修饰酶法（PEGME法），清除法（Clearancemethod）包括反应促进剂-过氧化物酶清除法（SPD法）和过氧化氢酶清除法（CAT法），免疫分离法（IS法）包括PEG/抗体包裹法（IRC法）和抗体免疫分离法（AB法）；测定LDL-C用的表面活性剂清除法（SUR法），过氧化氢酶清除法（CAT法），杯芳烃法（CAL法），可溶性反应法（SOL法）和保护性试剂法（PRO法）。这些方法因其简便、快速，易于自动化，已引起关注并广泛应用于临床常规分析。本文对HDL-C、LDL-C的测定方法进行了回顾，并重点介绍了各种匀相测定法的检测原理，以及临床测定时的技术要求。『关键词』：高密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白胆固醇匀相测定法众多流行病学与临床研究证实，动脉粥样硬化、冠心病的发生率与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关，而与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈正相关。近年来国内外相继研制开发出一些新型HDL-C、LDL-C的直接测定方法即匀相测定法(homogeneousmethods)试剂，因其简便、快速，易于自动化，已引起关注并广泛应用于临床常规分析。1HDL-C检测方法1.1概述测定血清HDL-C通常需根据各种脂蛋白的密度、颗粒大小、电荷等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将HDL与其他脂蛋白分离开，测定HDL组分中胆固醇含量。美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推荐。CDC胆固醇参考方法实验室网络(CRMLN)近来选用了一种“指定的比较方法”(DCM法)作为转移CDC参考方法准确性的适用方法—硫酸葡聚糖-镁(DS50-Mg2+)沉淀结合ALBK法。色谱法和电泳法因仪器、操作要求高等种种原因临床常规实验室也较少应用，多用于脂蛋白的研究。国外把临床常规实验室直接分离测定HDL-C的方法分为3代。第1代为化学沉淀法，常用的沉淀剂为多阴离子，如磷钨酸(PTA)、DS、肝素或非离子多聚体如聚乙二醇与某些二价阳离子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+)合用。最早为美国国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法，后多采用DS50-Mg2+法，欧洲则多采用磷钨酸镁沉淀法(PTA-Mg2+法)和聚乙二醇沉淀法(PEG法)。但此类方法受高甘油三酯(TG)的影响。第2代采用简便的磁珠DS-Mg2+分离法(美国ReferenceDiagnostics和Polymedco公司试剂)，省去了离心步骤，但需特殊装置，试剂不适于推广应用。第3代为匀相测定法，标本用量少，不需沉淀处理，可用于自动生化分析仪测定，在准确度和精密度方面基本达到NCEP的分析目标，因此在短短的数年里迅速被临床实验室采用。国内情况与国外有些不同，也可分为3代。第1代为电泳法；第2代为化学沉淀法，1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐PTA-Mg2+法作为HDL-C测定常规方法；第3代为目前广泛使用的匀相测定法。1.2匀相测定法1.2.1选择性抑制法(polyanionpolymer/detergentHDL-Cassay，PPD法)亦称选择性遮蔽法。其应用两种不同的表面活性剂及多聚阴离子，根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL-C。该方法的主要代表试剂盒为日本第一化学(DaiichipurechemicalsCo.)CholestestHDL和美国GenzymeDiagnostics公司的N-genousTMHDL-C试剂盒。主要反应式如下：1.2.2PEG修饰酶法(PEG-modifiedenzymeHDL-Cassay，PEGME法)在Mg2+的存在下，α-环糊精硫酸盐与CM、VLDL、LDL形成可溶性复合物。这些复合物能抵抗变构酶的作用；PEG6000或葡聚糖右旋糖苷与CHER和CHOD共价结合，引起酶的变构，变构酶对脂蛋白的大小和/或电荷具有选择性，其顺序依次为LDL＜VLDL≈CM＜HDL。而a-环糊精硫酸盐能限制CM、VLDL颗粒进入环状的环糊状结构，从而避免酶的催化作用，这种作用还与Mg2+浓度有关。因此在Mg2+及少量DS存在的前提下，可直接测定HDL-C。主要代表性试剂盒有日本协和(KyowaMedexCo.)、罗氏诊断(RocheDiagnostics)和德国CentronicGmbH公司的产品。主要反应式如下：1.2.3清除法(clearancemethod)1.2.3.1反应促进剂-过氧化物酶清除法(syntheticpolyme...