八种肺衣属地衣内生真菌的鉴定及抗菌活性研究范海云滕梦婷周生亮马琳李鹰刘欣欣丁孺孺张鹏摘要：采用平板分离法，从四川省黄龙、九寨沟等地采集肺衣属（lobariasp.）地衣中分离内生真菌，分别对其进行液体发酵后检测发酵液的抑菌活性，并对具有抑菌活性的内生真菌进行形态学及分子生物学鉴定。结果表明，分离得到37株内生真菌，其中有8株内生真菌的发酵液具有一定的抑菌活性，分别属于黑孢属、链格孢属、镰刀菌属和木霉属等。关键词：肺衣属（lobariasp.）地衣;内生真菌;分离鉴定;抗菌活性：Q949.34;Q93：A：0439-8114（2019）12-0092-05DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.12.021开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Abstract：Usingplateseparationmethod，andendophyticfungiwasisolatedfromLobariasp.lichens，whichwerecollectedfromHuanglongandJiuzhaigouofSichuanprovince.Theseendophyticfungiwereinoculatedintoliquidmedium.Theantimicrobialactivityofthefermentationfluidwererespectivelyevaluated.Thesefungiwereidentifiedbymorphologyandmolecularbiologymethod.Theresultsshowedthat37endophyticfungiwereisolated，and8ofwhichhadantibacterialactivity，whichbelongedtoMelanspora，Streptospora，FusariumandTrichoderma，respectively.Keywords：Lobariasp.lichen;endophyticfungi;separationandidentification;antibacterialactivity地衣是由真菌和藻类共生的一类特殊生物，肺衣属（Lobariasp.）地衣属于地卷目（Pcltigcralcs）肺衣科（Lobariaccac）。肺衣属地衣属于叶状中到大型地衣，革质或纸质，具有不规则或二叉分裂，分裂平卧或翘起。光合共生物为球形绿藻或蓝细菌[1]。肺衣属地衣俗稱老龙皮，具有很好的药用价值，其地衣体及提取物均可入药，健脾利水，消食化积。目前发现肺衣属地衣不但含有黄酮、蒽醌、缩酚酸、甾体、三萜酸以及芳香族化合物等类型多样的次级代谢产物，而且含有多种独特的化合物资源[2-4]。然而，地衣对大气污染十分敏感。近年来，肺衣属地衣由于受到大气污染及酸雨等的影响而数量逐年减少，因其在世界很多地区的生存受到威胁而变得非常稀有[5]。肺衣属地衣的生长对环境条件要求苛刻，导致其资源有限，难以大量采集，无法充分满足医药产业的需求。几乎所有的植物中都存在内生真菌[6]，地衣也不例外，它们与宿主共生，不引起宿主明显病症[7，8]。经过与宿主植物长期协同进化，产生了与植物相同或相似的代谢物质。这些次级代谢产物包括生物碱[9]、黄酮化合物[10]、多酚化合物[11]、香豆素类化合物[12]、蒽醌类化合物[13]、大环内酯类化合物[14]、新糖脂类化合物[15]、吲哚类二萜化合物[8]等大多具有一定的抗菌或抗癌活性。从与地衣共生的内生真菌中寻找这些代谢产物，可以克服植物生长周期长、产物量少的问题，还可以有效保护珍贵的地衣资源。肺衣属地衣在中国吉林、云南、广西、四川、浙江、陕西等多地都有分布，在太平洋群岛及喜马拉雅地区也广泛存在。全世界约分布67种，中国分布22种[16]。据有关研究，不同海拔高度对同一种属的地衣也会产生不同的影响[17]。黄龙位于四川省阿坝藏族羌族自治州松潘县境内，是中国保护完好的高原湿地。与黄龙相距100km的九寨沟地区位于阿坝-藏族羌族自治州九寨沟县漳扎镇，是白水沟上游白河的支沟。这两个地区的气候条件非常适合肺衣属地衣生存。为进一步开发肺衣属地衣的药用价值，从四川省黄龙及九寨沟地区采集了多种肺衣属地衣标本，从中分离内生真菌，寻找可以替代肺衣属地衣药用价值的真菌，以保护珍贵的地衣资源，同时为地衣-真菌生态关系的研究提供依据。1材料与方法1.1材料1.1.1培养基PDA固体培养基、PDB液体培养基、MHB培养基。1.1.2供试菌株大肠杆菌（EscherichiacoliATCC25922）、金黄色葡萄球菌（StaphyloccocusaureusATCC29213）、黑曲霉（AspergillusnigerCGMCC3.06327）、白色念珠菌（MoniliaalbicanATCC64547）、绿脓杆菌（PseudomonasaeruginosaCGMCC1.10274）。1.2方法1.2.1内生真菌的分离纯化取地衣样本，用自来水冲洗干净后用无菌手术刀切成1cm2左右的小块，用70%乙醇...