环抱素A单克隆全血试剂盒残余试剂再利用探究［摘要］目的:考察在应用荧光偏振免疫法(FPIA)对环抱素A进行血药浓度监测过程中，试剂盒残余试剂能否再次利用。方法:20例肾移植术后常规服用环匏素A的患者全血样品分别用环电素A标准试剂盒和混合试剂盒进行血药浓度测定,并对测定结果进行比较分析。结果:两试剂盒测定结果经配对t检验无显著性差异(P>0.05)o结论:环翘素A试剂盒残余试剂经过适当处理，可以再次利用。［关键词］环鞄素代血药浓度监测;试剂盒;残余试剂［中图分类号JR446.11［文献标识码］B［文章编号］1673-7210(2010)01(b)-146-02环鞄素A是目前临床常用的强效免疫抑制剂，广泛用于器官移植术后抗排异反应和某些自身免疫性疾病的治疗口］。由于在治疗剂量下，其生物利用度和药动学个体差异很大，治疗中进行血药浓度监测及药动学和药效学研究,对提高移植器官的存活率、减少毒性反应和排异反应的发生具有重要的临床意义［2-3］o环抱素A的血药浓度监测方法有高效液相色谱法(HPLC)、放射免疫法(RIA)、荧光偏振免疫法(FPIA)等TDX/FLX全自动快速血药浓度测定仪，高速离心机,TDX[4-5]oFPIA因方法快捷、灵敏可靠、重现性好而被临床广泛采用。在利用FPIA对环翘素A进行血药浓度监测过程中,主要依赖于环翘素A试剂盒，由于目前国内尚无技术生产该试剂盒，试剂盒的供应还依赖于进口,价格较为昂贵，是环翘素A血药浓度监测的最主要耗材，也是造成临床上环抱素A血药浓度监测成本和费用较高的主要原因。在环抱素A的实际血药浓度监测中，每套试剂盒利用100次左右时就不能再用,而试剂盒中仍残余不少试剂，扔掉极为可惜。为探讨如何利用这些残余试剂，降低临床监测成本，笔者进行了该项研究。1材料与方法1.1仪器与试剂单克隆全血浓度标准曲线盒（批号93258Q100）,质控盒（批号03071Q100）,标准试剂盒（批号13107Q102）,混合试剂盒（批号13107Q100的残余试剂与批号17774Q101的残余试剂进行混合）;以上均为美国ABBOTT公司产品。1.2样品来源2007年6~9月在我院进行环抱素A血药浓度监测的20例肾移植患者，年龄20~60岁，手术时间6个月~5年,均同时于9:00服药前抽取血样,分别用标准试剂盒和混合试剂盒进行环抱素A血药谷浓度测定。1.3方法所有样品均在同一上午测定。标准试剂盒测定:用微量移液器精密吸取150pl混匀后的全血样品,置于离心管中，精密加50pl红细胞溶解剂，再精密加300pl沉淀剂，在涡旋混合器上充分混匀，高速离心后将上清液全部倒入样品杯中用标准试剂盒进行测定。混合试剂盒测定:用微量移液器精密吸冃168pl混匀后的全血样品，置于离心管中,精密加50pl红细胞溶解剂，再精密加282pl沉淀剂，在涡旋混合器上充分混匀，高速离心后将上清液全部倒入样品杯中用混合试剂盒进行测定。所有操作均严格按照操作规程进行，微量移液器使用也严格按照说明书要求进行。2结果2.1两试剂盒的质控结果比较质控标准分三档，分别为高(680~920ng/ml).中(340~460ng/ml).低(120*180ng/ml),两试剂盒质控均符合标准要求，但混合试剂盒高、中、低质控值均比目标浓度低约12%o见表1O表1两试剂盒质控结果(ng/ml)Tab.lTheresultsofcontrolintworeagentpacks(ng/ml)2.2两试剂盒测定结果比较标准试剂盒测定结果(X)＞混合试剂盒测定结果(丫)的样品数为11个,X0.05)o见表2。表2两试剂盒测定结果统计学分析(n=20)行线性回归分析，得回归方程为:Y=-1.9380+1.005Tab.2Thestatisticanalysisoftheresultsintworeagentpacks(n=20)2.3两试剂盒测定结果相关性分析以标准试剂盒测定结果为X,混合试剂盒测定结果为Y进8X尸0.9994(n=20)o3讨论由表1可以看出，标准试剂盒高、中、低质控结果与目标浓度吻合较好，说明测定所用标准曲线液、试剂、质控液均较稳定，对测定结果影响较小;而混合试剂盒高、中、低质控结果虽然也在要求范围之内，但3个质控结果均比目标浓度低约12%,说明两个残余试剂盒混合后也很稳定,但与标准试剂盒相比存在一定的偏差，而偏差方向一致，存在一定的系统误差，为使测定结果更加准确，在利用混合试剂盒测定样品时笔者对每个样品均比常规抽取量(150pl)多抽取12%(18pl),而对沉淀剂比常规抽取量(300训)少抽取18pl,每份样品混合后...