花烟草再生与遗传转化体系的建立

花烟草再生与遗传转化体系的建立摘要:以花烟草(Nicotianaforgetiana)无菌苗植株的叶片为材料,研究不同NAA和6-BA组合培养的再生体系,得到最佳培?B基配方为NAA浓度为0.1mg/L和6-BA浓度为1.5mg/L,此时再生率达97%、平均芽数达。以卡那霉素(Km)、头孢霉素(Cef)为筛选试剂,探讨了影响农杆菌介导的花烟草遗传转化因素,表明卡那霉素敏感性浓度为20mg/L、头孢霉素抑菌浓度为300mg/L,在菌液OD600nm为时最适侵染时间为5min;最适筛选培养基(MS+0.1mg/LNAA+1.5mg/L6-BA+300mg/LCef+20mg/LKm)、壮芽培养基Z2(MS+0.1mg/L6-BA+0.01mg/LNAA+300mg/LCef+20mg/LKm)、生根培养基S2(MS+0.1mg/L6-BA+300mg/LCef+20mg/LKm)。以最佳组合进行遗传转化培养,获得的生根苗经炼苗移栽后存活35个株系,用CTAB法提取植物组织DNA,经PCR检测证实外源基因已转入植物组DNA中,阳性率为71%。本文采集自网络,本站不保证该信息的准确性、真实性、完整性等,仅供学习和研究使用,文中立场与本网站无关,版权和著作权归原作者所有,如有不愿意被转载的情况,请通知我们删除已转载的信息。关键词:花烟草(Nicotianaforgetiana);再生体系;根癌农杆菌;遗传转化体系中图分类号:S681.9;Q813.1;Q813.2文献标识码:A文章编号:0439-8114(2016)20-5384-05Abstract:UsingleafdisksofNicotianaforgetianaasexplants,theeffectsofdifferentconcentrationsofnaphthalene-aceticacid(NAA)and6-benzylaminopurine(6-BA)totheregenerationsystemwereexplored.Resultsshowedthatoptimummediumforthehighestdifferentiationrateamountingto97%andnumberofperbudsupto8.65wasMSmediumwithsupplementof0.1mg/LUsingleafdisksofNicotianaforgetianaasexplants,theeffectsofdifferentconcentrationsofnaphthalene-aceticacid(NAA)and6-benzylaminopurine(6-BA)ontheleafregenerationwereanalyzed.Onthebasisoftheregenerationmedium,thefactorsaffectingthegenetictransformationefficiency,suchasKanamycin(Km),Cefotaxime(Cef)andinfectionduration,werestudied.ResultssuggestedthattheoptimalconcentrationofKmforcallusselectingwas20mg/L,300mg/LCefcouldcontroltheagrobacteriumpollutionandsuitableinfectiondurationwas5min.Theoptimalmediumforselecting(MS+0.1mg/LNAA+1.5mg/L6-BA+300mg/LCef+20mg/LKm),induction(MS+0.1mg/L6-BA+0.01mg/LNAA+300mg/LCef+20mg/LKm)androoting(MS+0.1mg/L6-BA+300mg/LCef+20mg/LKm)werealsoselected.Finally,35transferredplantswereobtained,andPCRanalysisindicatedthattheexogenousgenehadbeenintegratedintothegenomeoftransformedNicotianaforgetiana.Keywords:Nicotianaforgetiana;regenerationsystem;Agrobacteriumtumefaciens;genetictransformationsystem花烟草(Nicotianaforgetiana)又称福吉特士烟草,起源于澳大利亚和北美洲[1],与烟草(NicotianatabacumL.)、本氏烟草(Nicotianabenthamiana)等同为茄科烟草属植物。其株型较小,株高1m左右,花朵美丽,花色为稳定的洋红色,从初夏至降霜均可开放,具有较高的观赏价值,可在园林中普遍应用[2]。国外的报道主要包括其自交不亲和机理的研究[3]、与烟草属中多种野生种共同作为比较基因组学[4]、传粉生物学[5]、形态进化学[6]的重要研究对象等,如Bissell等[7]研究了烟草属N.forgetiana与两个物种的花朵形态学遗传规律。但因花烟草的自交不亲和性,通常需要人工授粉获得后代[8],较耗费时力,而组培再生能够为其获得大量材料提供简单可靠的途径。自Horseh等[9]首次以烟草为材料获得转基因植株以来,越来越多不同植物材料的遗传转化得以研究和应用[10,11],为不同需求的基因功能分析提供了有效途??[12,13]。普通烟草、本氏烟草等的再生与遗传转化体系不断更新完善[14-17],成为观赏植物,尤其是木本观赏植物转基因功能验证的模式材料[18,19]。但是普通烟草的株型较大,占地多,不便于整体的开花调控;其花色易受光照、温度、湿度等环境因素的影响,容易干扰花色相...

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