临床检验杂志2010年11月第28卷第6期ChinJClinLabSci，Nov．2010，Vol．28，No．6·469·764X（2010）06-469-03文章编号：1001-·质量管理研究·化学发光免疫法检测AFP的空白限、检出限和定量检测限的建立与评价*温冬梅，张秀明，王伟佳，黄福达，何娟，肖礼红，欧阳能良，吴剑杨，李曼，庞嘉琳（中山大学附属中山医院检验医学中心，广东中山528403）摘要：目的建立并评价化学发光免疫法检测甲胎蛋白（AFP）的空白限（LoB）、检出限（LoD）和定量检测限（LoQ）。方法参A文件，考CLSIEP17-将AFP空白样品和系列低浓度样品在BayerCentaur240化学发光免疫检测系统上进行检测，依据数据LoD和LoQ，采用相应的统计学方法，确定血清AFP的LoB、同时用传统方法建立AFP的检测低限（LLD）、生物检的分布规律，测限（BLD）和功能灵敏度（FS）。结果A方案建立的LoB为0．80ng/ml，LoD为2．60ng/ml，LoQ为3．30ng/ml；应用EP17-应用两种方法建立的LoB和LLD均低于BLD为2．20ng/ml，FS为2．20ng/ml。结论用常规方法建立的LLD为1．00ng/ml，BayerCentaur240化学发光免疫系统检测AFP的分析灵敏度得到验证确认；实验室在验证仪仪器说明书声明的灵敏度性能，器声明的LoB时，应同时建立检测系统的LoD和LoQ，以便为临床提供更为可靠的检验结果。两种评价方案均具有实用性，国内实验室可视具体情况选择不同的评价方案。关键词：甲胎蛋白；方法学评价；分析灵敏度中图分类号：R446文献标识码：A［1］根据《医疗机构临床实验室管理办法》和医时取不同浓度的低浓度样品各1支，待溶解混匀后与常规标本同等条件下进行测定。1．5常规方法4-5］参照文献［确定AFP的LLD、BLD和FS。空白样品作10次批内重复测定，低浓度样品作日间重复测定，共10d，记录光强度值（RLUs）。1．6EP17-A方法A文件［3］确定AFP参照EP17-LoD和LoQ。空白样品进行60次测定，的LoB、每日1批，每批重复检测12次，共5d，记录浓度值。6个浓度的低浓度样品作日间重复测定，每日2批，每批共5d，记录浓度值。相隔时间＞2h，1．7统计方法LLD、BLD和FS的统计方法参照文献空白限（LoB）按国际标准化组织（ISO）的1．7．1［4-5］。1．7．2建议，设定Ⅰ类错误和Ⅱ类错误水平均为5%（α=β=5%），若空白值呈正态分布，按下式计算空白限：LoB=μB+1．645σB（式中μB和σB分别为空白样品检测值的均值和标准差）。若空白值呈非正态分布，则用非参数方法估计第95百分位数（PctB）的NB（ρ/100）+0．5］即：LoB=PctB100-α，即：LoB=在［值，0．95ˑNB+0．5］位置的结果。位置的结果=在［注：式中NB是重复检测的次数，ρ是百分位数。1．7．3检出限（LoD）若低浓度样品检测结果呈学实验室认可的要求［2］，临床实验室必须对检测系统的主要分析性能进行验证确认或分析评价，证实其能够满足预期的质量要求后才能用于常规检测。分析灵敏度是检测系统的主要性能指标之一，本文参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）发布的《检出限和定量检测限的确定方案》，建立化学发光免疫法检测AFP的空白限（LoB）、检出限（LoD）和定量检测限（LoQ），并与传统方法比较，现报道如下。11．1材料与方法检测系统BayerCentaur240化学发光免疫［4-5］［3］建立的检测低限（LLD）、生物检测限（BLD）和功能灵敏度（FS）进行分析仪及原装试剂、校准品（批号为CD54L、CD54H）和质控品（批号为9827301和9827302）。1．21．3空白样品低浓度样品用Bayer原装配套AFP稀释液作用Bayer原装配套AFP稀释液为空白样品。对AFP浓度为5．50ng/ml的新鲜血清作系列稀释，配制成一系列低浓度的AFP样品，其理论浓度（ng/ml）分别为0（空白）、1．10、1．65、2．20、3．30、4．40、5．50，介于预期检测限浓度14倍。1．4样品保存将配制好的系列低浓度样品分装于带盖一次性试管内于－20ħ冰箱保存，每次测定*基金项目：广东省医学科研基金项目（2009A2009763），中山市科技计划项目（20091A038）。1976年生，作者简介：温冬梅，女，副主任技师，学士，主要从事临床生物化学检验和实验室管理工作。E-mail：zxm0760@163．com。通讯作者：张秀明，主任技师，硕士研究生导师，·470·临床检验杂志2010年11月第28...