外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响作者：丁建中，张六通，李军川，胡利群，张燕翔【摘要】目的观察外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法60只SPF级昆明种小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组、凉燥组，每组15只。图像分析免疫组化法之各组第6天、第12天，第18天小鼠肺组织AQP1阳性表达率。结果各组AQP1阳性表达部位多在肺泡上皮处;温燥组第12天、第18天AQP1蛋白表达阳性率持续下降，凉燥组也呈同样趋势，尤以第12天为甚(P《0.01)，伴肺部炎性病变并随时间延长而加重。结论外燥致肺部炎性病变之时，伴肺泡液细胞内外转运相关的AQP1蛋白表达下降，提示与外燥伤肺、耗津病机相关。【关键词】外燥;小鼠;肺;水通道蛋白1Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofExternaldrynessAquaporin1(AQP1)inlungtissueofmice.Methods60Kunmingmice(SPF)weredividedintogroupA(normal)，groupB(normaltemperatureandexternaldryness),groupC(warm-Dry),groupD(Cool-Dry),15miceineachgroup.TheexpressionofAQP1wasdetectedonday6,12and18.ResultsComparedwithgroupA,thepositiveexpressionofAQP1waslocatedinthemembraneedgesofalveoli,andthepositiveratesofAQP1ingroupCandDwereremarkablyloweredonday12and18(P《0.01)astheevidentinflammationsoflung.ConclusionThedeareaseofAQP1expressionisrelatedwiththedamageofalveoliinexternaldryness.Keywords：Outer-Dry;Mice;Lung;Aquaporin1在哺乳动物体内发现13种能介导水的快速跨膜运动的非选择性细胞膜水通道蛋白(Aquaporin,AQP)[1，2]，AQP在肺、肾和消化系统等广泛存在，体内津液代谢主要与肺、脾相关，提示AQP为津液输布的生物学基础之一。文献报道小鼠细菌内毒素诱导急性肺损伤4～12h明显肺水肿时，肺泡AQP1表达明显减少，第14天肺水肿减轻时，肺毛细血管内皮细胞及间质细胞AQP1表达有所恢复[3]。在外燥可致小鼠气道、肺组织病变基础上，本实验动态观察外燥对小鼠肺组织AQP1蛋白表达的影响和与肺部病理改变的相关性。1材料1.1试剂和仪器LRH-250人工智能气候箱(广东医疗器械厂)，温度：(30～65)℃±1℃，相对湿度：(30%～90%)±3%)。LG风扇程控仪(MASTER-K30H，韩国)。兔抗小鼠AQP1多克隆抗体试剂盒(DA0648，200902，武汉博士德公司)，咔---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---唑(054K078，Sigam)、D-葡萄糖醛酸内酯(2711EC，Sigam)，其余试剂均为分析纯。1.2动物无特定病原体级(SPF)昆明种小鼠60只，体质量(17±1)g，雌雄各半，湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK(鄂)2008-2005。2方法2.1动物分组与造模60只昆明种小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组和凉燥组，每组15只，置人工气候箱内常规饲养，按文献造模[4]。处理后第6天、第12天、第18天检测相关项目。小鼠实验前4h常规禁食、禁水。2.2普通病理组织学观察断颈处死小鼠，取右肺中叶组织2cm×2cm，常规HE染色，镜检。2.3AQP1蛋白表达检测采用免疫组织化学法。取各组第6天、第12天、第18天小鼠右肺组织(0.5cm×0.5cm)，常规固定、包埋切片，微波法热修复抗原，依次滴加羊抗鼠AQP1多克隆抗体、生物素化兔抗羊二抗和SABC，DAB显色，苏木素衬染、透明封片。光镜下以肺泡周围及肺泡上皮出现棕色颗粒为阳性，JEDA80ID图像分析软件计算AQP1阳性表达“平均灰度”与“异形指数”，并按下式计算：AQP1表达阳性率(%)=肺组织AQP1阳性染色面积/肺组织总面积×100%2.4统计学处理实验数据以±s表示，采用SPSS13.0软件，资料之间比较用ANOVA分析，显著性检验采用多个样本均数间q检验(Newman-Keuls法)，P《0.05认为差异有统计学意义，检验水准为双侧α=0.05。3结果3.1病理观察常温常湿组各期无异常，常温燥组第12天肺部轻度充血;温燥组、凉燥组第6天肺泡充血、肺泡隔增厚与炎性细胞浸润，第12天、第18天肺泡瘀血加重，伴明显肺气肿现象，肺泡隔处明显增厚伴炎性细胞浸润，凉燥组肺泡纤维素沉积现象较其他组严重。3.2外燥对小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表达的影响见表1。3.3外燥对鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)表达“平均...