大孔树脂别离纯化宁夏枸杞总黄酮的研究离子交换与吸附,2021,27(3):202～211IoNEXCHANGEANDADSoRPT10N:1001—5493(2021)03-0202—10大孑L树脂别离纯化宁夏枸杞总黄酮的研究许亮师俊玲陈志娜王振平21西北农林科技大学食品科学与工程学院,杨凌7121002宁夏大学葡萄与葡萄酒教育部工程研究中心,银川750021摘要:考察了NKA一9,S.8,XDA一1,AB一8,HPD一100,HPD一6006种大孔吸附树脂对宁夏枸杞总黄酮的吸附和解吸性能,筛选出XDA.1树脂的效果最正确;考察了pH值,样液浓度,流速等对XDA.1树脂静态吸附效果的影响;并进行了动态吸附试验,确定出XDA.1树脂动态吸附枸杞总黄酮的最正确条件:样品液浓度为0.25mg/mL,控制流速为0.5mL/min,样品液pH5;最正确洗脱条件:洗脱液为80%的乙醇水溶液,用量为35mL(5倍柱床体积).在此条件下,枸杞总黄酮含量从27.2%提高到79.8%,回收率为87.4%,说明XDA.1树脂可用于宁夏枸杞总黄酮的别离纯化.关键词:宁夏枸杞;总黄酮;大孔树脂;吸附;解吸;纯化:0647.3文献标志码:A1前言枸杞(Lyci~mBarbarum)为茄科枸杞属,多年生落叶小灌木植物,是中国传统的,重要的药食两用同源植物之一】.中国枸杞有7个种3个变种,其中以宁夏枸杞(LyciumBarbarumLinnaeus)最为有名【3】.随着宁夏枸杞研究的深入,其抗癌,抗氧化,抗突变,抗肿瘤,抗菌,抗病毒,增强免疫力,防治血管硬化等功能性已被开掘.作为宁夏枸杞中重要的活性物质之一,枸杞黄酮也成为人们研究的一个热点【4J.但是,有关宁夏枸杞黄酮的研究多集中在粗提物水平【5J,关于其中具体的组分构成及其中有效成分的构效关系尚不明确.要深入研究这些内容,需要对枸杞黄酮进行精制和别离纯化,而有关这方面的研究鲜有报道.目前,树脂吸附法普遍应用于天然产物的别离纯化i61.本文拟通过大孔树脂吸附法对宁夏枸杞中的总黄酮进行精制和纯化,对大孔树脂别离纯化枸杞总黄酮的条件进行优化,旨在选取具有一定选择性,吸附量大,解吸效果好的树脂,并对其操作条件进行优化,以期为进一步深入研究提供根底,为针对性地开发利用宁夏枸杞中总黄酮提供理论依据.}收稿日期:2021年8月6日工程基金:国家自然科学基金(20862021)作者简介:i,tF~(1989～),男,河南省人,在读硕士研究生."通讯作者:E-maill:sjlshi2004@yahoo第27卷第3期离子交换与吸附?203?2实验局部2.1材料与仪器材料与试剂:枸杞,购自宁夏天宝商贸;芦丁标准品,购自中国药品生物制品检定所;大孔树脂NKA一9,S一8,购自南开大学树脂厂,XDA1,AB一8,HPD一100,HPD一600,购自西安蓝深特种树脂;乙醇,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠,盐酸等均为分析纯试剂.主要仪器:UV-1700型紫外可见分光光度计(日本岛津);电子恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器);HWY211恒温振荡器(上海智城分析仪):R一200旋转蒸发仪(瑞士Buchi);T-203电子天平(美国丹佛);pH一3C雷磁(上海精密科学仪器);层析柱(~15~200mm)等.2.2枸杞中总黄酮提取液的制备精确称量枸杞原料20.0g,按固液比1:10(w:v)参加80%乙醇超声波(250W)在60~C辅助提取20min,重复两次,合并提取液,得枸杞黄酮的粗提液.由于枸杞中含有大量多糖,会在上述提取过程进入提取液,需要通过乙醇沉淀的方法去除这些多糖.操作时,将所得黄酮提取液在40℃下进行真空浓缩,以减少样液体积.然后,在浓缩液参加3倍体积的95%乙醇,在4"C下静置24h,使多糖沉淀下来;再抽滤除去多糖沉淀,所得滤液再用95%乙醇沉淀,重复抽滤4～6次,至无肉眼可见混浊沉淀为止.所得滤液即为所有试验用枸杞黄酮提取液(自然pH6).2-3树脂预处理试验用6种树脂(AB.8,NKA一9,XDA1,HDP一100,HDP一600,S-8)用体积分数95%的乙醇浸泡24h,再用蒸馏水反复洗涤6~8次,至无乙醇味,然后用5%HC1溶液浸泡4h,用蒸馏水洗至中性,再用5%的NaOH溶液浸泡4h,用蒸馏水洗至中性,备用.2.4枸杞中总黄酮含量的测定准确称取芦丁标准品20.0mg用75%乙醇溶解,定容至lOOmL,摇匀.精确量取25.OmL上述标准液于5OraL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度线摇匀.分别吸取上述稀释液0,1.Oral,2.OmL,3.0mL,4.OmL,5.OmL于lOmL容量瓶中,加40%乙醇至5.0mL;添加5%NaNO20.3mL摇匀,放置6min;再添加10%AI(NO3)30.3mL摇匀,放置6min;添加40%NaOH4.0mL摇匀,40%乙醇定容至刻度,摇匀,60℃水浴lOmin.冷却至室温后在510nm处测...