痰一步离心制片方法的研究徐华苏旭尹万王丹璐(成都市第五人民医院病理科四川成都611130)【摘要】目的通过改进痰制片方法，提高痰制片质量，提高病理诊断质量。方法收集木院2011年6月至2012年6月100例痰标木用一步离心法制片。结果使用一步离心涂片方法制片的质量明显优于传统涂片的方法。100例痰液标木用传统涂片方法HE染色，显微镜下观察，检出1例有癌细胞。而采用一步离心涂制片方法HE染色，显微镜下观察，检出3例有癌细胞。所有检出癌细胞的病例通过活检，组织HE制片，病理诊断均诊断为癌。结论使用一步法离心涂片制作的痰液制片质量明显优于传统涂片制片方法。【关键词】一步法离心制片脱落细胞病理诊断HE制片【中图分类号】R36【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)25-0017-01近年来有关痰液标木涂片的制片方法：用挑取痰液内可疑部位标木肓接涂抹在载玻片上，癌细胞检出率极低。痰液标木有较多蛋白质，使用普通液基制片方法几乎不可能成功，使用化学试剂处理后制片，细胞有受损，制片成功较低，影响病理诊断。1材料和方法1.1材料收集成都第五人民医院2011年6月至2012年6月痰液标木100例。痰液收集方法：早晨醒来第一次深咳痰的痰液标木收集到干净杯子内送到病理科检测。方法：痰液涂片的方法：仔细挑选痰液内带血丝或者有可疑地方标木涂抹在载玻片上。固定方法均在95%酒精内固定一小时后进行HE染色。1.2一步离心涂片方法将同样方法收集到的痰液标木放置在专用的标木瓶内，瓶内有专用的痰液处理液和细胞固定剂。收集的标木放置30分钟后，放置在振荡器中振荡5分钟。用棉签除去上面漂浮物，放置在一步离心法制片机上进行制片，离心5分钟后，取下载玻片，制片完成。制片完成后放在95%酒精内固定30分钟后即可进行HE染色。用该方法进行制片吋可根据痰液量的多少反复进行制片可提高癌细胞的检出率。(1)HE染色方法蒸馆水：lmin,苏木精液染色：5〜lOmin,流水去苏木精液：lmin,1%盐酸■酒精：1〜3s,稍水洗：1〜2s,返蓝(用温水或1%氨水等)：5〜10s,流水冲洗：l~2min,蒸IS水洗：l~2min,0.5%伊红液染色：1〜3min,蒸憎水稍洗：1〜2s,80%乙醇：1.〜2s,95%乙醇I：2〜3min,95%乙醇II:2〜3min,无水乙醇I：3~5min,无水乙醇II：3〜5min,石炭酸-二甲苯:3〜5min,二甲苯I：3〜5min,二甲苯II：3〜5min,二甲苯III：3〜5min,中性树胶封固[1]o(2)免疫组化染色方法：水化涂片。Tri-EDTA热修复10・20分钟。PBS冲洗,3×5分钟。加3%H2O,室温20分钟。PBS冲洗，3×5分钟。加一抗孵育1・2小时。PBS冲洗,3×5分钟。加Envision抗孵育30分钟。PBS冲洗,3×5分钟。DAB显色。水洗。复染及封片⑵。2结果用传统方法制片的100例痰涂片标本在显微镜下进行判读，有30例标本制片满意：镜下见到吞噬了尘粒的组织细胞，有5例见到了含铁血黄素。其中1例查见癌细胞，经活检取材HE染色制片，显微镜下病理诊断得到了确诊。用一步法离心制片100例痰液标本。在显微镜下观察进行判读，有90例标本制片满意：显微镜下见到了吞噬了尘粒的组织细胞，其中有10例见到了含铁血黄素。其中，有4例查见了癌细胞，经活检取材HE染色制片得到了确诊。10例用一步法离心制片的标本的涂片不满意是由于痰液标本取样质量不高，不是深部咳出的痰，并且痰液量较少，因此对痰液的取样质量也是重要的前提条件。对4例查见癌细胞的阳性病例的痰液样本和选取了10例用一步离心法制片满意的痰液标本再次用一步离心法制片制作了涂片各5张，制片完成后用10%的中性福尔马林固定2小吋后用于免疫组化染色：CK、EMA、IcA、CD68、Vim的染色在显微镜下进行判读。总共14例痰液标本的一步离心法制作完成后免疫组化染色结果：14例标本涂片的吞噬尘粒的组织细胞，CD68和IcA阳性，CK和EMA阴性。在鳞状上皮细胞和柱状上皮等上皮细胞CK和EMA阳性，Vim、CD6&EMA阴性。4例HE染色查见癌细胞标本的再次用一步法离心制片完成的户涂片用免疫组化染色的癌细胞CK和EMA阳性，CD68和Vim及IcA染色阴性。免疫组化染色对于判读异型是否为癌细胞有重要意义。3讨论痰液内查见癌细胞是一种无损伤可反复进行的一种价格低廉的诊断肺癌的有效的方法。但该方法必须是在痰液...