联合检测外周血SurvivinmRNACEA在肠癌临床诊断的研究探讨

耳关合检测外周血SurvivinmRNA、CEA在肠癌临床诊断的研究探讨张倩馨1蔡永清1赵翌2(1人连市第三人民医院肿瘤科116000;2大连医科大学附属第一医院肿瘤科116000)【摘要】目的:探讨生存素(Survivin)mRNA、与癌胚抗原(CEA)在肠癌发生、发展中作用,为肠癌的早期诊断提供敏感、无创的指标。方法:采用RT-PCR方法分析SurvivinmRNA,采用ECU法(电化学发光免疫分析法)检测CEA分别在50例大肠癌患者、30例大肠良性疾病(肠息肉、肠腺瘤肠、肠炎)患者,20例正常人外周血表达情况,并分析它们与临床相关指标的关系。结果:SurvivinmRNA和CEA在肠癌组的阳性率分别为62%(34/55)和52%(27/55);与对照组有显著性差异(P<0.01)o阳性表达率与临床Duke&rsquo;s分期有关(P<0.01),与性别、年龄、病理组织类型无关(P&gt;0.05)o联合检测灵敏性与准确性高于任一单一指标,差异有统计学意义(P<0.05),特异性差异无统计学意义(P>0.05)o结论:外周血生存素SurvivinmRNA表达的检测,可作为早期诊断大肠癌及其转移的一个有价值的肿瘤标志物。联合CEA检测显著提高了检出率及特异性【关键词】SurvivinmRNACEART-PCR大肠癌【屮图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)51-0082-02大肠癌目前是最常见的消化道恶性肿瘤之一[1]且近年來发病率逐年递増。即使早期大肠癌患者,可能也有远处转移的现象存在,原因可能术前或术时就己形成肿瘤的微转移[2]外周血液屮肿瘤细胞的存在,往往提示肿瘤具有较高的转移倾向,是肿瘤复发转移的主要原因,也是其治疗失败及患者死亡的主要原因之一。如能早期诊断则能为大肠癌患者治疗争取时间,达到更好的治疗效果[3]外周血中肿瘤标志物的探索,成为当前研宄的热点问题。1.资料和方法1.1标本来源取自大连医科大学附属一院2010年1月到2011年2月的收治相关患者。经病理证实的大肠癌组50例:年龄36〜84岁,其中女性21例,男性29例;采血前均未行放化疗。经病理证实为大肠良性病变组30例:年龄22〜71岁,其中女性12例,男性18例,肠腺瘤6例,肠息肉17例,肠炎7例。健康组20例,无心、脑、肺、肾、肝等器质性疾病史:年龄21〜70岁,.其中女性10例,男性10例。1.2.方法1.2.1RT-PCR检测外周血SurvivinmRNA表达受检者晨空腹用抗凝采血管采集肘静脉血2.0ml。淋巴分离液分离奋核细胞,RNAisoPlus细胞裂解液提取总RNA,测260nm及280nm吸光度(A)值及1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。依据两步法试剂盒(大连宝生物技术奋限公司)进行逆转录及PCR。取PCR产物及DNAMarker,进行电泳,并通过紫外凝胶荧光成像系统进行分析。1.2.2电化学发光免疫法检测CEA受检者晨空腹抽3ml静脉血,离心后分离血清。按照试剂盒的说明书,全自动操作检测。CEA>3.4ng/ml,判断为阳性。1.2.3统计学方法用X2检验比较计数资料,P<0.05差异具有统计学的意义。2.结果2.1总RNA的完整性及纯度鉴定OD260/OD280值为1.8-2.2间,用1.0%琼脂糖凝胶电泳及EB染色分析见28s、18s、5s三条带,表明完整性良好。2.2RT-PCR扩增图用大连宝生物公司的DNAMarkerD(100bp-2OOObp)作为相对分子量的质量标准,电泳结果可显示5条带(lOObp、250bp、500bp、750bp、lOOObp、2000bp)。指标SurvivinmRNA的扩增产物为439bp;以&beta;-actinmRNA268bp作为内参照,其在本实验所奋标本中均稳定表达。阳性表达电泳图表现为439bp处出现亮带。2.3Survivin的表达Survivin在大肠癌组阳性表达率为62%;良性病变组的阳性表达率6.7%;健康组无阳性表达。差异有统计学意义(P=0.00)o2.4CEA的表达大肠癌组CEA阳性率为52%,良性组表达率为16.67%,健康组CEA的表达5%。三组比较,差异有统计学意义(P=0.00)o2.5大肠癌患者外周血SurvivinoCEA表达与临床病理特征的关系详见表1。SurvivinmRNA在Duke&rsquo;s分期A+B期与C+D期阳性率的差异奋统计学意义(P=0.024)。CEA在Duke&rsquo;s分期A+B期与C+D期阳性率的差异也奋统计学意义(P=0037)不同病理类型中,不同年龄组、不同性别组的大肠癌患者,SurvivinmRNA及CEA阳性率的差异均无统计学意义(P<0.05)。详见表1。表1大肠癌患者SurvivinmRNA、CEA表达与临床病理特征的关系因此在外周血中能找到有助于非小细胞肺癌早发现、早诊断的肿瘤标志...

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