SELDI-TOF-MS在口腔鳞癌早期诊断中的研究【摘要】目的：为鉴定口腔鳞癌的血清标志物和病理分型提供依据。方法：采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及其配套的金芯片(GoldChip)对30份腺癌及健康人30份计60份血清，进行蛋白质谱指纹图分析，筛选口腔鳞癌的差异蛋白。结果：在口腔鳞癌患者血清中有3个高表达，m／z(质荷比)分别是9194．06Da，11681．15Da和51370．19Da，应用数据建立分类树模型，获得了一个由7个蛋白9194．06Da，51370．1Da，15879、1Da，6624．57Da，8929．80Da，1l681．1Da，1013．77Da组成的标志蛋白组合模式。在训练组中，该模型的敏感性和特异性分别为92％和96％。结论：该模型对诊断口腔鳞癌具有较高的灵敏度和特异度，值得临床应用。【关键词】口腔鳞癌；蛋白质质谱；诊断R2【文献标号】A1671-8725（2014）10-0157-02目前，在我国口腔颌面部肿瘤中，死亡率最高的口腔鳞癌仍居榜首，口腔鳞癌发病率高、预后差的现状仍无根本性改观。因此口腔鳞癌患者的筛查和早期诊断对口腔鳞癌的疗效显得尤为重要。本研究拟应用表面加强激光解吸电离飞行时间质潜技术及其配套的蛋白质芯片对口腔鳞癌患者和正常对照者血清中的蛋---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---白质组图谱进行检测，并结合相关软件建立决策分类树诊断模型，进行口腔鳞癌的初步诊断。1资料与方法1.1临床资料与标本选择2008年1月1日-2009年12月3113间，在南京大学医学院住院首次治疗的口腔鳞癌患者30例，其中男24例，女6例，年龄为42-78岁，中位年龄62岁，临床病例资料完整，人院第二天晨起抽血，2h内提取血清后即人-80℃保存。对照组选用同期院内职工体检健康者血清标本30例，作为正常对照组，男19例，女11例，年龄为40—83岁，中位年龄60岁。1.2试剂与仪器l％的乙酸钠、0.9％的氯化钠、l％的N一2一羟乙基哌磺嗪一N一2乙磺酸(HEPES)、l％的1，4一二硫代苏糖醇(DTT)来自上海化学试剂公司；芥子酸(SPA)、乙睛(ACN)、n一氰基一4一羟基肉桂酸(CHCA50mg／m1)、MALDl校正标准肽来自美国SIGMA公司；All—in—oneNP20标准蛋白质芯片、WCX一2芯片来自美国Ciphergen公司。高速台式离心机型号5415功(德国Eppendorf公司)、微量加样器(德国Eppendorf公司)、SELDI质谱仪PBS1IC(美国Ciphergen公司)。1.3实验方法1.3.1血清标本收集清晨空腹采取全血标本，常温下放置2h，待自然凝固后，4℃1000r／min离心15min，取上层血清EP管分装后立刻置血清标本库一80℃冰箱保存备用。1.3.2血清样品预处理取出一80％保存血清，0℃冰浴中溶解，4℃10000rpm离心2min，取5斗l血清样品，加入8mmol／L尿素10斗l，4℃振荡30min，吸取上清用于蛋白质芯片检测。1.3.3SELDI操作流程在CMIO蛋白质芯片8个点(A—H点)的表面分别加10mMHCI10¨l，在湿盒内放置10分钟后，吸去剩余的HCI，用去离子水洗芯片3次。然后将芯片安装于生物处理器上。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---芯片A—H各点用200斗l结合缓冲液(100mMNaAc乙酸钠，pH4.0)预处理2次，每次室温下振荡孵育5分钟。然后每点交叉滴加100“l已处理的口腔鳞癌或正常对照血清样品，室温振荡孵育60分钟。弃掉表面样品，各点用200“l结合缓冲液洗涤3次，每次5分钟。最后各点再用lmMHEPES(pH7.0)200¨l迅速洗涤一次。卸去生物处理器，待芯片表面自然晾干后，各点加两次0．5斗lSPA，待芯片表面干燥后，用蛋白质芯片阅读机进行蛋白质谱分析。1.3.4数据采集采用PBSII—C型蛋白质芯片阅读机读取cM10芯片数据。每天使用前用Ciphergen公司提供的all—in—oneNP20蛋白芯片校正质谱仪，系统质量偏差为0.1％。检测芯片时蛋白质芯片阅读机设置条件如下：激光能量200，检测敏感度9，优化分子量范围1000—70kDa，每个样品收集50个点，采用Ciphergenproteinchip分析软件自动采集数据。2结果1口腔鳞癌组和正常对照组血清蛋白指纹图谱绝大多数的蛋白质峰数量和强度在口腔鳞癌患者和正常对照者血清中基本相同，P≤0．05时，两组间有9个差异性表达蛋白峰，其中3个在口腔患者血清中高表达，m/z分别是9194．06Da...