一种抗真菌抗生素发酵工艺优化及稳定性研究朱海东+谢萍华+黄通新+摘要：镜检观察菌株菌落及细胞形态，用正交试验设计法确定菌株最佳发酵条件。结果表明，该菌株与链霉菌形态类似，革兰氏染色呈阳性，最佳发酵条件为葡萄糖１５ｇ／Ｌ，酵母液４０ｇ／Ｌ，装液量３０ｍL／２５０ｍL，发酵时间７２ｈ。所产抗生素对高温（９５℃）具有较高的稳定性，在酸性和中性环境中比较稳定。关键词：菌株；抗真菌抗生素；发酵工艺：ＴＱ４６５．２文献标识码：Ａ：0439－８114（２０14）09－2050-02ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅＳｔａｂｉｌｉｔｙｏｆＡＫｉｎｄｏｆＡｎｔｉｆｕｎｇａｌＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃZHUHai-dong，XIEPing-hua，HUANGTong-xin(HangzhouVocationalandTechnicalCollege，Hangzhou310018，China)Ａｂｓｔｒａｃｔ：Thecolonyandcellmorphologyofonestrainwasobservedwithmicroscopy.Theorthogonalexperimentwasconductedtoconfirmtheoptimalfermentationconditions.TheresultsshowedthatthisstrainwassimilartoStreptomycesonmorphology.G+andtheoptimalfermentationconditionswereglucose15g/L，yeastpowder40g/L,loadedliquid30ml/250ml，fermentationtime72h.Theantibioticsproducedbytheactinomycesstrainwerehighlystableinhottemperature（95℃），acidicorneutralenvironment.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：bacterialstraim；antifungalantibiotic；fermentationprocess现代医学的进步提高了重症病人的生存几率，然而由于这些病人的抵抗力较差，易发生条件致病真菌引起的深部感染［１－４］。本研究从土壤中筛选到一株放线菌ActinormycesＳ１，前期试验证明该菌株的代谢产物能对部分导致深部真菌感染的微生物具有较好的抑制作用。本研究通过试验了解该菌株的基本生长特点，运用正交试验优化其发酵工艺条件，并对该抗生素粗提物的相关性质进行了研究，为后续对该菌株的进一步深入研究打下基础。１材料与方法１．１试验材料１．１．１试验菌株由杭州职业技术学院生物制药研究所提供。１．１．２主要培养基斜面培养基：可溶性淀粉２５ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．４ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４·７Ｈ２Ｏ１ｇ、蛋白胨１ｇ、琼脂２０ｇ、１０％土豆汁１Ｌ（小块状土豆１００ｇ，１Ｌ水煮沸１ｈ后过滤定容１Ｌ，１２１℃蒸汽灭菌２０ｍｉｎ）；平板培养基（ｇ／Ｌ）：高氏一号培养基［５］；指示菌培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖４０、蛋白胨１０、琼脂２０,ｐＨ５．６,１１５℃蒸汽灭菌２０ｍｉｎ；种子培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖１５、硫酸镁０．５、蛋白胨５、磷酸氢二钾１、硫酸亚铁０．０１、碳酸钙０．４,ｐＨ自然，１２１℃蒸汽灭菌２０ｍｉｎ；原始发酵培养基组成（ｇ／Ｌ）：葡萄糖１０、酵母粉３０、蛋白胨５、磷酸氢二钾１、氯化钠１、碳酸钙１、接种量为１０％，培养基ｐＨ为６．５，装液量５０ｍＬ／２５０ｍＬ三角瓶。１．２试验方法１．２．１菌株生长过程观察将菌株接种至斜面培养基上，恒温３０℃培养，当菌株生长至２、３、４、５、６ｄ时，观察菌落特征，并用印片染色法［６］观察菌株形态，用Ｍｏｔｉｃ数码显微镜观察，拍摄并记录其生长过程。１．２．２发酵液中抗生素效价测定取１０ｍL发酵液１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液，以白色念珠菌为指示菌株，用生物管碟法［７］测定发酵液抗菌活性。１．２．３菌株发酵条件优化在原始发酵培养基的基础上，选择对培养基中的碳源葡萄糖、氮源酵母粉以及摇瓶装液量和发酵培养时间４个因素采用Ｌ９（３４）正交试验进行优化［８］，其中４因素分别为葡萄糖的浓度（ｇ／Ｌ）为５、１０、１５，酵母液的浓度（ｇ／Ｌ）２０、３０、４０，摇瓶装液量（ｍL）３０、４０、５０，发酵培养时间（ｈ）６６、７２、７８。１．２．４抗生素的稳定性研究热稳定性试验。将发酵上清液置于９５℃处理１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ后，测定其抗生素效价。不同ｐＨ条件下的稳定性试验。将发酵液上清液分为３份，调节ｐＨ，使之分别处于酸、中、碱性环境中，在９５℃条件下处...