MicR-370在高频脉冲电磁场下对骨髓间充质干细胞调控作用的初步研究郭杰苏伟黄钊谢能峰何肖丞(广西医科大学第一附属医院创伤骨科屮心广西南宁530021)【摘要】R的：通过检测>380MHz高频脉冲电磁场刺激不骨髓间充质干细屮microRNA-370的表达变化规律，探讨mir-370对骨髓间充质干细胞可能的影响。方法：采用贴壁筛选法分离培养SD人鼠骨髓间充质干细胞，取第3代细胞随机分为两组：电磁场照射组、空白对照组，分别提取总RNA通过Realtime-PCR的结果推测mir-370对大鼠间充质干细胞屮的bmp-7的调控作用。结果：经全骨髓细胞贴壁筛选法分离培养的SD人鼠骨髓间充质干细胞符合人鼠骨髓间充质干细胞基本特征。大鼠基因组模板BmP7已扩增出来，大小与预测一致。在转染克隆有BMP7基因3’UTR质粒的实验组中,mimics组与空白组和NC组相比,(P>0.05)无统计学差异，证明mir-370不能与BMP7基因3’UTR结合，影响萤光素酶的活性。结论：mir-370不能负向调控bmp-7蛋白从而到达抑制骨髓间充质干细胞的作用。【关键词】小分子RNA骨髓间充质干细胞高频脉冲电磁场调控定量聚合酶链式反应【屮图分类号】R68【文献标识码】B【文章编号】2095-1752(2013)10-0386-04【Abstract】[Objective]:>380MHzhigh-frequencypulsedelectromagneticfields(HF-PEMFs)stimulationbydetectingbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs),microRNAs-370(mir-370)expressionvariationexploremir-370onBMSCsmay.[Methods]:adherencescreeningmethodisisolatedandculturedSDratBMSCs,the3rdgenerationcellswererandomlydividedintotwogroups:theelectromagneticfieldradiationgroup,blankcontrolgroup,respectively,totalRNAwasextractedbyRealtime-PCRresultsspeculatemir-370regulationofbmp-7inratmesenchymalstemcells.[Results]:adherencescreeningmethodofwholebonemarrowcellswereisolatedandculturedinSDratBMSCsinlinewiththebasiccharacteristicsofratBMSCs.TheratgenomeamplifiedtemplateBmp7out,sizeandforecasts.ClonetransfectedtheBMP7gene3'UTRplasmidexperimentalgroupMimicsthebestchoicegroupcomparedwiththecontrolgroupandtheNCgroup,(P>0.05)wasnotstatisticallydifferent,andthatmir-370cannotbecombinedwithBMP7gene3'UTRaffecttheactivityoftheluciferase.[Conclusion]:mir-370isnotsuppressionofBMSCstoreachthenegativeregulationofbmp-7protein.【Keywords】smallmoleculeRNA;Bonemarrowmesenchymalstemcells;high-frequencypulsedelectromagneticfields;regulation;Quantitativepolymerasechainreaction引言骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)是存在于骨髓基质系统中的一种组织干细胞，具冇自我更新能力和多向分化潜能，可分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞等类型的细胞，是组织工程理想的种子细胞来源[1】。本实验前期工作证明，高频脉冲电磁场(High-FrequencyPulsedElectromagneticFields,HF-PEMFs)[2】能够对大鼠骨髓间充质干细胞(BoneMarrowMesenchymalStemcells,BMSCs)的增殖和诱导成骨产生抑制作用。骨形成蛋白-7(BMP-7)又称成骨蛋白-l(OP.l)，是骨形态发生蛋闩家族中的成员，具有广泛的生理功能及良好的诱导成骨的能力。小分子RNA(microRNA)[3]是一组由约为20—24个核苷酸组成的非编码小分子RNA，它们参与机体的各种重要的生理和病理过程，近十年来的研究发现microRNA在细胞的增殖、分化、和凋亡等多种生命活动中发挥着重要作用。1材料与方法1.1设计：随机对照细胞培养观察实验。吋间及地点：于2010年12月至2011年8月在广西医科大学基础实验中心104馆完成。1.1.1实验动物：选取雄性，3周龄，体重约为50—60gSPF级的SD大鼠，由广西医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（桂）2009-0002«1.1.2实验所需仪器及试剂：CO2培养箱（THERMO）,AIR-TECH型生物洁浄工作台（苏浄集团安泰公司），倒置相差显微镜（Olympus公司），高频电磁场发射器:BF5118对讲机，三轴式电磁波测试仪（TES-1394,台湾泰仕）。-20°C低温冰箱（海尔公司）-20°...