不同提取方法提取辣椒及其制品中DNA效果研究罗阿东陆邹红蔡秋摘要采用CTAB法、SDS法、吸附柱法对辣椒及其制品中的基因组DNA进行提取，分别通过核酸蛋白测定仪、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光PCR扩增检测。结果表明，CTAB法、SDS法、吸附柱法均能从鲜辣椒、干辣椒、油辣椒、辣椒酱中抽提得到DNA，从核酸蛋白测定仪检测得到的DNA提取物OD260/OD280值可看出，CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较吸附柱法的低;DNA样品的琼脂糖凝胶电泳发现，各样品均无大范围明显拖尾，说明DNA提取完整度较好;实时荧光PCR检测分析3种提取方法的不同样品基因组DNA均出现PCR扩增曲线。经试验比较确定，提取方法的效率由高到低依次为吸附柱法>SDS法>CTAB法。可见，吸附柱法最适用于辣椒及其制品中核酸提取。关键词辣椒及其制品;DNA提取;CTAB法;SDS法;DNA吸附柱S641.3文献标识码A1007-5739（2019）01-0212-02AbstractCTAB，SDSandDNAadsorptioncolumnmethodwereadoptedtoextractDNAfromchillianditsproducts.Nucleicacidproteindetectormethod，agarosegelelectrophoresismethodandreal-timefluorescencePCRamplificationmethodswereappliedtomeasuretheDNAsamples.TheresultsshowedthatDNAcouldbeextractedbyCTAB，SDSandadsorptioncolumnfromchillianditsproducts.ItcouldbeseenfromtheOD260/OD280valueofDNAextractbynucleicacidproteindetector，theconcentrationofDNAextractedbyCTABandSDSwaslowerthanthatbyadsorptioncolumn.AgarosegelelectrophoresismeasurementshowedDNAextractedwith3methodstherewasnoobvioustailsmearinginallareas，theresultsshowedthatDNAhadbetterextractionintegrity.ThePCRamplificationcurveofgenomicDNAof3differentextractionmethodswasdetectedbyreal-timefluor-escencePCR.Throughexperimentandcomparison，itwasdeterminedthattheefficiencyoftheextractionmethodwasasfollowing：adsorptioncolumnmethod>SDSmethod>CTABmethod.Insummary，theadsorptioncolumnmethodisthemostsuitableforextractingnucleicacidfromchillianditsproducts.Keywordschillianditsproducts;DNAextraction;CTABmethod;SDSmethod;DNAadsorptioncolumn辣椒是人們生活中必不可少的蔬菜作物，具有药理、经济、食用、营养等方面的价值。我国的辣椒制品种类繁多，如油辣椒、糟辣椒、辣椒酱等，辣椒制品多样化推动了我国辣椒产业经济的发展。辣椒在世界各地得到广泛种植，但是同时也面临着连作障碍、土壤传播疫病、生长条件、产量及质量等诸多问题，人们借助转基因技术以及辣椒分子育种技术，对辣椒的生长条件、栽培技术、病虫害防治等方面进行了研究[1-2]。DNA是遗传信息的载体，提取高质量的DNA分子是开展植物基因组学及转基因检测研究的基础，通常要求所提取的DNA分子应具有较高的纯度，且无断裂、降解现象，提取过程中尽量少使用有毒化学药品以保证下游工作的进行[3-4]。辣椒中富含的酚类化合物、蛋白质、多糖等物质会抑制DNA提取质量，辣椒制品内的酸、油、盐、添加剂等也会影响DNA提取效率及质量[5-6]。目前，国内外已研究出许多提取植物DNA的方法，例如CTAB法、SDS法、碱裂解法、苯酚法、吸附柱法等[7-10]。本次研究针对辣椒及其制品的成分特点，选取CTAB法、SDS法和吸附柱（试剂盒）等DNA提取具有代表性的方法，对辣椒及其制品进行DNA提取，并比较提取效果，目的在于筛选出一种能简单、快速、高效获取高质量DNA的方法，为辣椒及其制品分子生物学的研究奠定基础。1材料与方法1.1试验材料试验材料有鲜辣椒、干辣椒、油辣椒和辣椒酱，均购自市场。试剂有PremixExTaq（ProbeqPCR）（荧光PCR反应液）、DL2000DNAMarker、MiniBESTUniversalGenomicDNAExt-ractionKit（DNA提取试剂）、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）、蛋白酶K、氯仿/异戊醇（24∶1）、75%乙醇、GoldView核酸染料，均购买于宝日医生物技术有限公司。仪器有实时荧光PCR仪（7500Fast，美国AppliedBios-ystems）、化学发光凝胶成像系统（DOCXRS，美国Bio-rad）、凝胶电泳仪（PowerPac3000，美国Bio-rad）、高速冷冻...