酶联捕获法检测抗TORCHIgM抗体的实验分析欧阳辉（广东省佛山顺德妇幼保健院检验科528300）【摘要】目的建立检测TORCHIgM抗体的酶联捕获技术。方法应用酶联捕获法检测103例弓形虫（TOX）、135例风疹病毒（RV）、128例巨细胞病毒（CMV）、98例单纯疱疹病毒（HSV）感染者血清中IgM抗体，并与常用的间接EUSA法进行比较。结果酶联捕获法特异性及敏感性均高于间接EUSA法，且不受RF因子的影响。结论酶联捕获法敏感性高，特异性强、简便、快速，重复性好，只有实际应用价值。【关键词】TORCH免疫球蛋白M酶联免疫技术捕获法【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）13-0154-02TORCH是指一组病原体：T即刚地弓形虫，0即others,比如乙型肝炎病毒、HIV病毒、梅毒螺旋体等，R即风疹病毒，C即巨细胞病毒，H即单纯疱疹病毒［1】。弓形虫感染是一种人和动物共同可以发病的疾病，猫与其他动物是主要传染源。后天轻型感染者多无明显的症状，但患者血清中可以检测到抗体；重型感染者者即可引起各种各样的临床症状，如高热、肌肉或关节疼痛、淋巴结肿大等；通过胎盘宫内感染者可引起死胎、早产，出生后可表现一系列中枢神经系统症状以及眼、内脏的先天损害［2］。风疹病毒是一类RNA病毒，人是其唯一自然宿主。RV通过呼吸道传播，人类对RV普遍易感，一般症状较轻，预后佳，可通过注射RV疫苗进行主动防御［3］。妊娠早期（4个月内的）孕妇感染RV后，病毒可通过胎盘传染给胎儿，引起胎儿先天性风疹综合症（CRS）。巨细胞病毒为双链DNA病毒，主要通过血液、性、垂直传播［3-4］o新生儿表现生长发育迟缓、肝脾肿大、黄疸、血小板减少性紫癜、溶血性贫血、呼吸窘迫、昏睡、抽搐等，多数患儿出生后数小时或数周内死亡；存活者的后遗症包括神经性耳聋，永久性智力迟钝、脉络膜视网膜炎、视力丧失、癫痫以及心脏畸形等。单纯疱疹病毒感染，主要可以引起人类的疱疹性U腔炎、湿疹性疱疹、疱疹性角膜结膜炎、新生儿疱疹、疱疹性外阴阴道炎等［5］。本试验不区分单纯疱疹病毒-I型或单纯疱疹病毒-II型。因此，TORCH感染的检测在临床上具奋重要意义。在病原体急性感染的诊断中，通常需检测TORCH项B的系列IgM抗体［3］。0前在市场上可见到的IgM抗体检测试剂盒又可分为标记抗原的捕获法和标记抗体的间接法2种。本研宄采用标记抗原的方法，建立捕获ELISA技术对经PCR确诊的103例TOX、135例RV、128例CMV、98例HSV阳性血清进行检测，并与间接EUSA法作比较，现报道如下。1.材料和方法1.1血清来源103例TOX、135例RV、128例CMV、98例HSV阳性血清（经PCR从TORCH感染者血清中筛选），79份类风湿性关节炎患者血清及197例正常人血清均来自广东省佛山顺德妇幼保健院。以上患者及正常人经肘静脉采血，分离血清后置于-20'C冰箱保存。1.2主要试剂TORCH捕获ELISA法试剂盒购自意大利DIESSEDiagnosticaSeneseS.P.A.公司，TORCH间接EUSA法试剂盒购自德国欧蒙医学实验诊断冇限公司。1.3方法参照各厂家试剂盒说明书进行试验操作。证实两种方法在检验TORCH患者血清特异性IgM吋的灵敏度和特异性，并且分析是否存在差异［6］。分别用以上两种方法检测30份类风湿性关节炎患者血清，比较RF因子对以上两种试剂的干扰性，并分析是否存在差异。1.4数据处理采用EXCEL、SPSS统计软件进行统计学处理，使用t检验比较结果差异，P〉0.05吋差异有统计学意义。2.结果2.1两种ELISA方法检测IgM的灵敏度和特异性比较PCR试剂及2种试剂盒共检测661份临床血清样本。捕获ELISA法试剂盒的检测结果见表1，间接ELISA法试剂盒的检测结果见表2。表1PCR试验及捕获ELISA法试剂盒的检测结果捕获法试剂盒PCR试剂合计阳性阴性阳性4630463阴性1197198合计464197661表2PCR试验及捕获EUSA法试剂盒的检测结果间接法试剂盒PCR试剂合计阳性阴性阳性4637470阴性1190191合计464197661捕获ELISA法试剂盒和间接ELISA法试剂盒的检测灵敏度均为99.8%[463/464],特异性分别为100°/。[197/197]，96.4%[190/197],结果符合率分别为99.8%[(463+197)/661],98.8%[(463+190}/661]。两种试剂盒的检测灵敏度、特异性、结果符合率均达到试剂盒要求(95%)，但捕获EUSA特异性明显高...