紫色胡萝卜中花青素的提取、分离及抗氧化活性研究【摘要】目的：从紫色胡萝卜中提取、分离花青素，并对提取所得的花青素进行体外抗氧化活性研究。方法：以维生素C作为阳性对照，研究不同浓度的花青素对?OH、H2O2、02-?的清除效果。结果:从紫色胡萝卜提取所得的花青素对?OH、H2O2、02-?均有较好的清除率。结论：紫色胡萝卜中分离提取的花青素有较好的抗氧化活性。【关键词】紫色胡萝卜；花青素；抗氧化；提取分离中图分类号】R2842【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2016)20-0033-03紫色胡萝卜(PurpleCarrot)为十字花科萝卜属植物，成熟于秋冬季节。紫色胡萝卜富含多酚，维生素和胡萝卜素等物质外，还含有丰富的花青素(Anthocyanins)o花青素又称花色素，是一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属黄酮类化合物［1］，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。从红葡萄渣中提取的葡萄皮红是最早且最丰富的花青素，它于1879年在意大利上市［2］。花青素作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定营养和药理作用，在食品、化妆品和医药等方面有着巨大的应用潜研宄发现，紫色胡萝卜中所含的花青素主要为稳定性较高且生物活性较好的酰化花青素，其含量占总花青素的70%以上［3］。花青素能减少动脉粥样硬化［4-5］，具有抗肿瘤［7］，抗菌消炎［7］，以及清除自由基的抗氧化作用［4，6，8］。在机体的新陈代谢过程中会产生超氧自由基、轻自由基等基团都是很多生理和病理的积极参与者［9］。国内对紫色胡萝卜的研究较少，导致营养价值极高的紫色胡萝卜一直没有被大众所认识［10］。而欧美等国将紫色胡萝卜作为一种保健食品被大量种植，紫色胡萝卜汁也深受大众喜爱［3-7］。本研宄系统研宄了紫色胡萝卜中花青素的提取、分离及体外抗氧化活性，为紫色胡萝卜的深度开发研究奠定一定的基础。1仪器与材料11仪器UV-2450型紫外可见分光光度计（岛津企业管理（中国）有限公司）；CP214型号电子天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司）；TG16-WS高速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；HHS11-4R型电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）。12材料硫酸亚铁、邻二氮菲、过氧化氢30%、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、邻苯三酚、（羟甲氨基甲烷（Tris）、硫酸亚铁、无水乙醇、浓硫酸、浓盐酸等均为国产分析纯，为汕头市达濛精细化学品有限公司产品；紫色胡萝卜购买自云南滇东北地区。2方法21花青素的提取取一定量的新鲜紫色胡萝卜，去芯、充分捣碎后称量放入烧瓶内，加入80%的乙醇（料液比为1:2），调节pH为3〜4，在50°C水浴下回流提取lh，趁热抽滤，滤渣再用80%的乙醇回流提取30min，趁热抽滤。合并提取液，并将其旋转蒸发至无醇味，真空冷冻干燥得粗品。22花青素的分离、纯化采用AB-8型大孔树脂对粗提的花青素进行纯化。其纯化流程为：花青素粗体物一AB-8型大孔树脂吸附1h—用蒸馏水洗脱糖类、色素等->10%的乙醇（pH=4）洗脱杂质-*30%乙醇洗脱杂质（pH=3〜4）—80%乙醇洗脱（pH=3〜4）—旋蒸（40°C、30r/min）—花青素纯化液一真空冷冻干燥—样品低温（4°C以下较好）保存备用。23不同浓度的待测液对?OH的清除率羟自由基清除率的测定方法参考文献［11-12］，10mL具塞试管中加不同浓度的待测液ImL,依次加入lmL075mmol/LFeS04,lmL075mmol八邻二氮菲，最后加入001%H2O21mL,37°C保温lh,4mL蒸馏水调零，在536nm下测定吸光度。空白管用ImL蒸馏水代替花青素，ImL蒸馏水代替001%H202,损伤管用ImL蒸馏水代替花青素，样品空白管用ImL蒸馏水代替001%H2O2。OH清除率=(1-A2-A3A0-A1)X100/%式中，A0为空白管的吸光值；A1为损伤管的吸光值；A2为样品空白管的吸光值；A3为样品对照管的吸光值。24不同浓度的待测液对H2O2的清除率测定方法参考文献［12-13］，25mL具塞试管中加不同浓度的待测液ImL,加入40mmol/LH2O225mL,加入65mL蒸溜水，室温反应lOmin后在230nm下测定吸光度。空白管用ImL蒸馏水代替花青素，样品空白管用25mL蒸馏水代替H2O2。H2O2清除率=A0-(A1-A2)AO式中，A0为不加花青素的吸光度；A1为样品对照组的吸光度即加花青素又加40mmol/LH2O2;A2为不加40mmol/LH2O2的吸光度。25不同浓度的待测液对O2-...