第1页共7页怀地黄的茎尖组织培养和快繁技术研究摘要研究怀地黄组织培养与快繁技术。以怀地黄茎尖部分为外植体，在以MS作为基本培养基的基础上，添加不同浓度的NAA、IAA、2，4-D、6-BA，配制不同浓度的培养基，对怀地黄的茎尖进行分化与诱导、继代与增殖及生根培养试验，并对试管苗进行炼苗移栽。获得了怀地黄茎尖培养脱毒与诱导、增殖和生根的培养基，以及生长所需要的外部条件和配套技术。关键词怀地黄；组织培养；快繁；培养基S656.23+9文献标识码A1007-5739（2014）06-0104-01StudyonTissueCultureandRapidPropagationTechnologyofRehmanniaGlutinosaLiboschDINGFangHOUQian-qianLIUGuang-qingSUNXi-yunSUNFeng-ling第2页共7页（ShangqiuAcademyofAgricultureandForestryinHenanProvince，ShangqiuHenan476000）AbstractThepaperaimedtostudythevirus-freetissuecultureandtherapidpropagationtechnology.WithRehmanniaglutinosaLiboschshoottipasexplants，MSwasusedasthebasicmediumwithdifferentconcentrationofNAA，IAA，2，4-Dand6-BAtoconfiguredifferentmedia，thetestsofdifferentiationandinduction，subcultureandproliferationaswellasrootingcultureonRehmanniaglutinosaLiboschwerecarriedoutandthetest-tubeplantletswerehardenedandtransplanted.Intheexperiment，themediaofdetoxificationandinduction，proliferationandrootingwereobtainedaswellastheexternalenvironmentalconditionsfortheplantgrowthandthematchingtechnology.第3页共7页KeywordsRehmanniaglutinosaLibosch；tissueculture；rapidpropagation；culturemedium地黄为玄参科多年生草本植物，具有抗衰老、抗肿瘤、降血糖等功效，影响内分泌系统、心脑血管系统、中枢神经系统、造血系统等的活性，有助于调节免疫功能。地黄在我国分布广泛，可见于山西、河南、陕西、内蒙古、山东、安徽、河北、四川等地，以河南的温县、孟县、博爱为地黄的道地产区。主要为大田栽培。怀庆地黄是指产于古怀庆府的地黄，是著名的“四大怀药”之一[1]。针对目前地黄病毒病尚无安全有效药物进行治疗的现状，通过植物茎尖脱毒技术，利用植物营养体进行快速繁殖，以保持原品种全部的遗传性，实现该品种种质的一致性。1材料选择选择正在生长的怀地黄的茎尖。2培养条件地黄的组织培养与快速繁殖以MS为基本培养基，在此基础上添第4页共7页加萘乙酸（NAA）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）、二氯苯氧乙酸（2，4-D）、吲哚丁酸（IBA）、吲哚乙酸（IAA）。其中，①诱导与分化培养基：MS+0.3mg/L6-BA+0.02mg/LNAA+0.1mg/LGA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂；②继代与增殖培养基：MS+0.3mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂；③生根培养基：1/2MS+0.05mg/LIAA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂。以上培养基的pH值为5.6～5.8，均分装于培养瓶中，封口后，高压灭菌20min，待用。培养条件：温度（26±2）℃，湿度65%～70%，光照强度为2000～2500lx，光照时间12～14h/d。3无菌材料的获得和培养从正在生长的植株中，选择无病虫、健壮、长势强、具有品种特征、长2～3cm的茎尖部，去掉可见叶，用10%洗洁精溶液浸泡8～10min后，再用流动自来水冲洗20～30min，吸干水分。在无菌室内，于超净工作台上用75%酒精溶液处理20～30s，再用0.1%升汞溶液灭菌8～10min后，用无菌水冲洗4～5次，然后剪成0.5～第5页共7页1.0cm长，含有1～2个腋芽的茎段，快速接种到诱导与分化培养基中诱导腋芽萌发。分化与增殖培养：接种到诱导与分化培养基中的生长点，1周后有芽萌动，30～40d芽长到3～4cm高时，即可将芽切下转入继代与增殖培养基中进行增殖培养，10～15d后有丛芽长出，继代周期25～28d，1年可快繁8～11次，芽增殖倍数3～6倍。4壮苗与生根培养选取生长健壮、长势好的芽苗转入生根培养基中培养，经过25d培养的小苗生长健壮[4]，该培养基7～10d有根原基形成，10～15d有根形成，25～35d可形成3～5条2～4cm的根。5试管苗的移栽将培养了30d左右大量生根且长势良好的怀地黄组培苗打开培养瓶炼苗5d，炼苗时首先要打开瓶口[5]，增加昼夜温差，使植株快速适应自然环境，提高试管苗的...