尿多酸肽对耐药急性白血病作用的体外研究

尿多酸肽对耐药急性白血病作用的体外研究沈佳坤郑林董慧娟(上饶市人民医院血液科江西上饶334000)【摘要】目的:研究尿多酸肽(CDA-2)在耐药急性白血病中的作用。方法:MTT法检测CDA-2对K562及K562/A02细胞增殖的影响,流式细胞术研究细胞凋亡及细胞内阿霉素浓度的改变。结果:CDA-2能显著抑制两种细胞株的牛长,呈时间依赖性和浓度依赖性。CDA-2能诱导两种细胞的凋亡,能增加耐药细胞中阿霉素的浓度。结论:CDA-2是一种有前景的逆转急性白血病耐药的药物。【关键词】急性白血病;多药耐药;尿多酸肽【中图分类号]R733,7【文献标识码]B【文章编号11003-5028(2015)8-0554-02耐药是急性白血病化疗失败、疾病复发、病人死亡的主要原因。白血病的耐药表现为不仅对一种药物的耐受,而且对不同作用机制的多类药物的耐受,也就是多药耐药。多药耐药形成机制包括细胞内药物排出增多(如多药耐药蛋白P-gp过表达)、细胞解毒作用增强(如GS「&pi;过表达)、DNA损伤修复能力增强(如06■烷基鸟瞟吟DNA烷基转移酶增多)等。其中P-gp表达是最主要的多药耐药的机制。P・gp是细胞膜表面的一种糖蛋白,它能将细胞内的药物主动“泵”至细胞外,从而减少药物对细胞的毒性作用。如何绕过P-gp的泵作用、逆转耐药,提高白血病的治疗效果是当前白血病研究的重大课题。K562/A02是一种高表达P-gp的多药耐药K562细胞株,它可在含2ug/ml的阿霉素的培养体系中长期牛存,是体外研究多药耐药的一个良好的细胞模型。尿多酸肽(CDA-2)是从健康人尿中分离、提取的由多种有机酸和多种小分子多肽组成的水溶液[1],在MDS中具有诱导原始细胞凋亡的作用。有文献报道⑵CDA-2对急性白血病细胞株(K56-2)细胞有一定的生长抑制作用,但对于耐药急性白血病细胞的效果如何,尚无文献报道。木文利用K562/A02细胞株为耐药急性白血病的模型,研究尿多酸肽对耐药急性白血病的体外效果。1材料和方法1.1细胞株及培养条件K562及K562/A02细胞株由本科实验室传代保存。将细胞置于含10%胎牛血清的RPMI1640中,37°C、5%CO2、饱和湿度条件下常规培养。K562/A02细胞培养体系中加入终浓度为2&mu;g/ml的阿霉素(ADM)以维持其耐性。实验前2周K562/A02细胞培养体系撤除阿霉素。取对数生长期的细胞进行实验。1.2MTT法检测细胞增殖取对数生长期细胞,调整细胞浓度,以l&times;105/ml的终浓度接种于96孔板,加入不同浓度的药物,空白对照组以培养基补足。每孔总体系200&mu;loCO2孵箱内培养24或48小时(h),每孔加MTT工作液20&mu;l,置于培养箱内再孵育4h。1000转/分离心,小心吸去上清,加入DMS0200&mu;l/孔,吹打,使紫蓝色甲朕充分溶解。在酶标仪570nm波长处读取吸光度值(A),以时间为横轴,A值为纵轴,绘制生长曲线图。实验重复三次,每次设3个复孔,取平均值为最终结果。按下列公式计算细胞增殖率:细胞生存率二(A处理组・A空白组)/(A对照组・A空白组)&times;100%细胞生长抑制率=100%-细胞生存率1.3AV-PI法检测细胞凋亡细胞以2&times;105/ml的浓度接种于6孔培养板,分别加入2&mu;g/ml>4&mu;g/mK6&mu;g/ml的CDA-2,同吋设空白对照。12小时后收获细胞,lOOOrpm离心5分钟,收集1&times;106个细胞。冷PBS洗涤2遍,细胞重悬于100&mu;ll&times;Bindingbuffer,置于流式细胞仪专用试管中。加5&mu;lAnnexinVFITC和5&mu;l碘化丙碇(PI),轻轻混匀,避光室温反应15分钟,上流式细胞仪。1.4流式细胞术测定细胞内阿霉素浓度:K562/A02细胞以2&times;105/ml的浓度接种于6孔培养板,第一孔设为空白对照,不加药物;第二孔加入2&mu;g/ml的ADM,第三孔加入6mg/mlCDA-2及2&mu;g/mlADM,培养24小时。收集l-5&times;105个细胞,lOOOrpm离心5分钟,弃上清。加入适量冷PBS,细胞重悬,lOOOrpm离心5分钟,重复2次。以冷PBS重悬细胞,上机行流式细胞检测。流式检测激发波长488nm,接收波长575nm.o1.5统计分析:实验数据均为计量资料,数据之间的比较采用独立样本t检验。所有数据经SPSS11.5统计分析。以P<0.05为有统计学意义。2结果2.1CDA-2对K562及K562/A02有相似的生长抑制作用我们用MTT法检测了CDA-2对两种细胞株的生长抑制作用,结果显示不同浓度的CDA-2作用于两种细胞株24小时...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“举报”。

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

所有的文档都被视为“模板”,用于写作参考,下载前须认真查看,确认无误后再购买;

文档大部份都是可以预览的,笔杆子文库无法对文档的真实性、完整性、准确性以及专业性等问题提供审核和保证,请慎重购买;

文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为依据;

如果您还有什么不清楚的或需要我们协助,可以联系客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

确认删除?