EMSCs复合CPC支架体外生物相容性的研究

EMSCs复合CPC支架体外生物相容性的研究陈琛许安平摘要:目的觀察磷酸钙骨水泥(CPC)对鼻粘膜间充质干细胞(EMSCs)体外诱导成骨的影响。方法取出SD大鼠的全层鼻粘膜行体外培养并扩增EMSCs,选取第三代生长状况良好的EMSCs与CPC混合培养,行成骨诱导14天。将EMSCs/CPC设定为CPC材料组,单纯EMSCs培养为对照组。ALP检测两组EMSCs碱性磷酸酶活性,茜素红染色法测定钙结节面积大小,免疫印迹法检测成骨诱导相关蛋白表达水平;鬼笔环肽染色法动态观察EMSCs在CPC表面的细胞形态;MTT法检测CPC对EMSCs增殖的影响,并进行统计学分析。结果①CPC材料组较对照组中碱性磷酸酶活性在成骨诱导14d后较高,染色程度深;茜素红染色中CPC材料组的钙结节更大;鬼笔环肽染色液染色第3天EMSCs形态呈圆形,细胞形态未完全伸展,第7天EMSCs呈长梭型,第14天后EMSCs成堆生长;免疫印迹法检测CPC材料组表达collagenI和osteocalcin高于对照组(P关键词:EMSCs;CPC;生物相容性:R318.08文献标识码:ADOI:10.3969/j.issn.1006-1959.2020.23.020:1006-1959(2020)23-0068-05Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofcalciumphosphatecement(CPC)ontheinductionofosteogenesisofnasalmucosalmesenchymalstemcells(EMSCs)invitro.MethodsThefull-thicknessnasalmucosaofSDratswastakenoutandculturedinvitroandexpandedEMSCs.Thethird-generationEMSCswithgoodgrowthconditionweremixedandculturedwithCPC,andosteogenicinductionwasperformedfor14d.SetEMSCs/CPCastheCPCmaterialgroup,andcultivatepureEMSCsasthecontrolgroup.ALPwasusedtodetectthealkalinephosphataseactivityofthetwogroupsofEMSCs,thealizarinredstainingmethodwasusedtodeterminethesizeofcalciumnodules,theWesternblottingmethodwasusedtodetecttheexpressionlevelofosteoinduction-relatedproteins;thephalloidinstainingmethodwasusedtodynamicallyobservethecellmorphologyofEMSCsontheCPCsurface;MTTmethodwasusedtodetecttheimpactofCPContheproliferationofEMSCsandperformstatisticalanalysis.Results①ThealkalinephosphataseactivityintheCPCmaterialgroupwashigherthanthatinthecontrolgroupafter14dofosteogenicinduction,andthestainingdegreewasdeeper;InAlizarinRedstaining,thecalciumnodulesintheCPCmaterialgroupwerelarger;onthethirddayofstainingwithphalloidinstaining,theEMSCswereroundinshapeandthecellmorphologywasnotfullyextended.Onthe7thday,theEMSCswereinalongspindleshape,andafterthe14thday,growthinpiles;theexpressionofcollagenIandosteocalcinintheCPCmaterialgroupdetectedbywesternblottingwashigherthanthatofthecontrolgroup(PKeywords:EMSCs;CPC;Biocompatibility骨缺损(bonedefect)的治疗是临床常见的难题,骨移植术是目前临床治疗骨缺损的重要方法之一,但各种骨移植术都有一定的局限性。通常都会因为取骨量有限,需进行二次手术,对患者机体损伤较大,发生免疫反应等因素影响治疗效果[1,2]。磷酸钙骨水泥(calciumphosphatecement,CPC)具有良好的生物相容性以及骨诱导性,是临床常见的植骨材料[3]。外胚间充质干细胞(ectomesenchymalstemcells,EMSCs)是一种具有多向分化的潜能的特殊类型干细胞[4]。因其取材量大、手术操作方便、损伤小,是骨组织工程良好的种子细胞[5]。本课题组既往研究表明EMSCs在特定的条件下可以被诱导成骨,并可高表达干细胞标志蛋白[6]。基于此,本研究通过体外培养EMSCs,复合CPC培养,探讨CPC与EMSCs的生物相容性和EMSC成骨细胞分化的水平,现报道如下。1材料与方法1.1实验动物、试剂与仪器6周龄健康雄性SD大鼠(体质量约150g)购于江苏大学动物实验中心(动物使用许可证:SCXK苏2002-0045);CPC(购自英国施乐辉公司);胎牛血清(Gibco,USA)、0.25%胰酶(Sigma);DMEM/F12购于hyclone通用公司(美国)。二巯基乙醇购于鼎国生物科技有限公司(北京);羊抗兔collagenI和osteocalcin,羊抗鼠nestin和vimentin,山羊抗鼠-cy3IgG,山羊抗...

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“举报”。

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

所有的文档都被视为“模板”,用于写作参考,下载前须认真查看,确认无误后再购买;

文档大部份都是可以预览的,笔杆子文库无法对文档的真实性、完整性、准确性以及专业性等问题提供审核和保证,请慎重购买;

文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为依据;

如果您还有什么不清楚的或需要我们协助,可以联系客服邮箱:

biganzikefu@outlook.com

常见问题具体如下:

1、问:已经付过费的文档可以多次下载吗?

      答:可以。登陆您已经付过费的账号,付过费的文档可以免费进行多次下载。

2、问:已经付过费的文档不知下载到什么地方去了?

     答:电脑端-浏览器下载列表里可以找到;手机端-文件管理或下载里可以找到。

            如以上两种方式都没有找到,请提供您的交易单号或截图及接收文档的邮箱等有效信息,发送到客服邮箱,客服经核实后,会将您已经付过费的文档即时发到您邮箱。

注:微信交易号是以“420000”开头的28位数字;

       支付宝交易号是以“2024XXXX”交易日期开头的28位数字。

笔杆子文秘
机构认证
内容提供者

为您提供优质文档,供您参考!

确认删除?