环氧化酶-2基因启动子区-765G/C多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研宄赵斌1孙照莲2(1泰山医学院附属医院眼科271000;2山东大学附属省立医院胸外科250021)【摘要】R的探讨环氧化酶-2(COX-2＞棊因启动子区-765G/C多态性与糖鉍病视网膜病变(DR＞的相关性。方法采用熔解曲线不同的高通量SNP分型法方法，在屮国泰安地区汉族人群屮，对182例2型糖尿病变伴视网膜病变者(DR),150例健康对照者的COX-2棊因-765G/C多态性进行检测；比较分析各组间基因型频率及等位基因频率进行分析。结果-765G/C位点的基因型GC在糖尿病视网膜病变组明显增高(OR=2.14,95%CI=1.10-4.16)o结论泰安地区汉族人群屮，COX-2棊因-765G/C多态性与DR有相关关系，-765G/C位点的基因型GC可能是糖鉍病视网膜病变的遗传易感因素。【关键词】糖尿病，2型糖尿病视网膜病变环氧化酶2多态性【屮图分类号】R587.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)35-0128-02糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)是糖尿病常见的微血管并发症之一，长期慢性的高糖血症是其发病的基础有观点认为免疫/炎症因素在DR的发生发展中起到中心作用。环氧化酶-2,在正常状态下低表达或不表达，但在炎症介质、细胞因子、激素等体内外因素诱导K表达。CipolloneF等人曾经报道，炎性介导的环氧化酶2可以诱导前列腺素E2的表达，导致炎性斑块屮巨噬细胞的棊质金属蛋白酶2(Matrixmetalloproteinase2,MMP2)和基质金属蛋白酶9(Matrixmetalloproteinase9,MMP9)的高表达，进而影响炎性进程。已i正实，COX-2基因才(rs20417)多态性会影响COX-2蛋白的表达，但就该位点多态性与DR的相关性鲜见报道。本研宂旨在探讨屮国泰安地区汉族人屮COX-2棊因-765G/C多态性与DR的内在联系。1资料与方法---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.1资料1.1.1仪器与试剂仪器：7500实吋定量PCR仪(美国应用生物系统公司)；PERISM-3100型基因测序仪(美国应用生物系统公司)；试剂：DNA抽提试剂盒(天跟生化科技有限公司)；AmpliTaqDNAPolymerase,StoffelFragment(美国座用生物系统公司)；乙二胺四乙酸(ethylenedia2minetetraaceticacid,EDTA)抗凝管;Tris-HCI；氯化钾；氯化镁；dATP,dCTP,dGTP和dUTP;0.2×SYBRGreenI；5%二甲基亚砜(DMSO)；2.5%甘油；ROX染料；双蒸水1.1.2研究对象疾病组：2006年至2011年期间在山东省泰山医学院第一附属医院眼科住院治疗的糖尿病变伴视网膜病变患者182例，男118例，女63例，52±12岁。患者均为:1.符合1999年WHO标准诊断的2型糖尿病(T2DM);2.均行眼底镜检查和眼底血管荧光素造影，参照1985年全国眼底病协作组制定的分级标准，达到DR非增殖期；3.山东泰安籍汉族。对照组.•为与疾病组同期在泰山医学院第一附属医院保健查体中心查体的无糖尿病的健康对照150例，男98例，女52例，(53±13)岁。其年龄、性别与病例组匹配。所有受试者均为山东泰安籍汉族人。1.2方法1.2.1标本采集及基因组DNA抽提采集空腹外周静脉血2mL,乙二胺四乙酸(ethylenedia2minetetraaceticacid,EDTA)抗凝管储存。DNA抽提试剂盒(天跟生化科技有限公司)抽提基因组DNA,-20°C保存待用。1.2.2基因型检测目的片段扩增：1.应用熔解曲线不同的高通量SNP分型法。2.PCR引物序列参照文献［1］。应用Oligo®6设计。引物序列见表1。引物由上海生工生物技术冇限公司合成。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---3.PCR反应体系为15μL,K中基因组DNA为lμL。剩余组分为：三种引物每种0.2μmol/L；AmpliTaqDNAPolymerase,StoffelFragment(应用生物系统公司｝1.8U;10mmol/LTris-HCI；40mmol/L氯化钾，pH8.0；2mmol八氯化镁；dATP,dCTP和dGTP各50μmol/L；25μmol/LdTTP；75μmol/LdUTP；0.2×SYBRGreenI；5%二甲基亚砜(DMSO);2.5%甘油;0.25μMROX染料。不足15μL部分由双蒸水(dH20)补足。4.美国应用生物系统公司生产的7500实时定量PCR仪进行S的基因扩增。循环条件：95°C12min,95°C15s,60°Clmin共40个循环，再加熔解曲线分析。1.3统计学处理以X2检验计量资料，以t检验比较计...