不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究◇研究原着◇?6l3?中【临『末药理学与治疗学中国药理学会主办2005Jun;10(6):613—616不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究肖梅芳,张学梅,白香,谭焕然北京大学医学部基础医学院药理学系,北京100083;大连大学医学院基础医学部药理教研室,大连116622,辽宁摘要目的:通过观察不同类型糖尿病动物模型糖原代谢的变化,初步探讨糖原代谢异常在糖尿病发病过程中的作用方法:首先建立4种糖尿病小鼠模型:四氧嘧啶诱导模型,STZ诱导模型,n5一STZ诱导模型和葡萄糖激酶基因敲除模型,并对模型小鼠和肌糖原的含量,并采用Westernblot方法对葡萄糖激酶基因敲除模型鼠肝组织中葡萄糖激酶的蛋白表达量进行测定.结果:血糖检测结果显示各模型组空腹血糖值均显着高于对照组,表明糖尿病造模基本成功:除n5一STZ诱导模型外,其它模型组肝糖原的含量均明显低于对照组.此外,与对照组比较,4结果表明葡萄糖激酶基因敲除模型鼠肝组织中葡萄糖激酶的蛋白表达显着降低,这可能是该模型肝糖原含量减少的机制之一.结论:糖尿病动物模型出现糖原代谢异常.表现为肝糖原和肌糖原减少,提示糖原代谢在糖尿病发病过程中起着重要的作用.关键词糖原;动物疾病模型;四氧嘧啶;链脲佐菌素;糖尿病;葡萄糖激酶文献标识码:A文章编号:1009—2501(2005)06—0613—04糖原代谢是体内糖代谢的重要组成部分,体内体内血糖的重要来源,当机体需要葡萄糖或者血糖——08—08—03和2【x】2AA2l42O1)肖梅芳.女.硕士,研究方向:分子药理学谭焕然.通讯作者,女,教授,研究方向:分子药理学Tel:010.82802O04E.mail:tanlab@sun.bjmu.edu,O11水平降低时,它可以迅速被动员分解入血以补充血糖6一磷酸酶,故肌糖原不能分解为葡萄糖来补充血糖,它主要为肌肉收缩提供能量糖原代谢的紊乱可能会引起血中葡萄糖浓度升高,进而导致糖尿病象,包括经典的1型糖尿病模型——四氧嘧啶诱导模型和链脲佐菌素(streptozotoein,STZ)诱导模型,以及2型糖尿病模型——链脲佐菌素诱导的2型糖尿病模型(n5一STZ诱导模型)和由本室构建的肝脏特异性葡萄糖激酶基因敲除模型,观察糖尿病动物模型糖原代谢的改变,对糖原代谢在糖尿病发病过程中的作用进行初步探讨,以期为糖尿病的临床防治提供实验依据:1材料与方法1.1动物与试剂雄性昆明小鼠,C57BL/6J小鼠和ICR小鼠,SPF(specialpathogenfree)级,体重18～22g,购自北京大学医学部实验动物中心,动物合格证号:SCXK(京)2002—0001四氧嘧啶购自Fluka公司(美国);链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司(美国);罗氏血糖仪购自罗氏诊断产品(德国);兔来源的葡萄糖激酶多克隆抗体购自SantacⅢz公司(美国);碱磷酶标记羊抗兔二抗购自北京中杉金桥生物技术;葡萄糖试剂盒(氧化酶法)购自北京北化康泰临床试剂;肝糖原测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;NBT/BCIP染色试剂盒购自华美生物工程公司;其余试剂均为国产分析纯.导模型的制备:昆明小鼠,6～8周,禁食12h后,以100mg?kg～一次性尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水.?614?高水平者作为糖尿病模型;STZ诱导模型的制备:C57BL/6J小鼠,6～8周,禁食12h后,一次性腹腔注射STZ100mg?kg体重(0.1tool?L柠檬酸钠稀释,1)H4.5),1周后空腹血糖高于16.7nmlol?L作为糖尿病模型鼠.注射生理盐水作为对照组:型的建立:取5d龄ICR小鼠,腹腔注射STZ100mg?kg..体重(0.1mol?L柠檬酸钠稀释,pH4.5),5d后再补注STZ60mg?kg体重小鼠断乳后,给予正常饲料喂养4周后剪鼠尾采血,用罗氏血糖仪测血糖:腹腔注射等量生理盐水作为对照组;基因敲除糖尿病模型的建立:本研究室已经成功构建了一种新的2型糖尿病动物模型——肝脏特异性葡萄糖激酶(glucokinase,GK)基因敲除小鼠模型,该模型的建立基于Cre—loxP条件性基因打靶技术:首先将两个同方向的loxP序列插入到目的基因GK外发生正确同源重组的ES细胞显微注射入小鼠囊胚,移植入假孕雌鼠,获得Fl代嵌和体小鼠:嵌和体小鼠进一步杂交后得到条件打靶小鼠:将该打靶小鼠与肝脏特异性表达Cre重组酶(Alb—Cre)的转基因昆明小鼠杂交,得到肝脏特异性葡萄糖激酶基因敲除小鼠:以正常昆明小鼠作为对照组:1.4血糖测定小鼠禁食8h以上(不禁水),眼球后静脉丛取血,3000r?min离心8min分离血清.参照试剂盒说明...