应用慢病毒转染hTERT基因在人卵巢腺癌SW626细胞中的表达研宄赵国栋1回丽妹2赵建军3通讯作者1.河北工程大学附属医院普外一科河北邯郸056002；2.河北工程大学附属医院产科河北邯郸056002；3.河北工程大学附属医院泌尿外科河北邯郸056002【摘要】目的：观察携带人端粒酶逆转录酶基因(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)的慢病毒表达载体转染SW626细胞(人卵巢腺癌细胞株)frihTERT基因在靶细胞屮的表达。方法：将携带目的基因hTERT的重组慢病毒表达载体及包装系统共转染293T细胞(人胚肾上皮细胞株)，通过超速离心沉淀法浓缩病毒上淸后转染SW626细胞。转染前将靶细胞分为转染组、空转组及对照组，完成转染后•于显微镜卜观察靴细胞屮绿色灾光蛋白(GreenFluorescentProtein,GFP)显色，并应用PCR检测SW626细胞屮hTERTmRNA的表达。结果:293T细胞经重组慢病毒与包装质粒共转染后能产生重组病毒并且能够成果的将目的基因hTERT高效地转导入靶细胞SW626细胞屮并稳定表达，荧光显微镜不可直接观察到GFP;转染后的SW626细胞经检测，其内hTERT基因mRNA表达明显增强。结论：重组慢病毒表达载体LV4-pGLV-EFla-EGFP-hTERT能够高效稳定地将外源hTERT基因导入SW626细胞并使其长久表达，为卵巢肿瘤生物治疗研究奠定了科研基础。【关键词】慢病毒；转染；hTERT；端粒酶【中图分类号】R737.31【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2015)8-0273-02DETECTIONOFHUMANTELOMERASEREVERSETRANSCRIPTASEGENEEXPRESSIONINSW626AFTERLENTMRALTRANSFECTIONZhaoGuodonglHuiLimei2ZhaoJianjun3*---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---(Hebeiengineeringuniversityaffiliatedhospital,Generalsubjectl,obstetric2,urology3,HeBei,HanDan056002)*correspondingauthor:ZhaoJianjun[Abstract]Objective:ToobservehTERTgeneexpressionafterlentiviralexpressionvectorwhichcarryinghumantelomerasereversetranscriptasegene(hTERT)wastransfectedintoSW626cells(humanovarianadenocarcinomacellline).Methods:Therecombinantlentivialvectorswereharvestedfrom293Tcellsandwereconcentratedbyultracentrifugation.Thetargetcellsweredividedintothreegroups,thetransfectiongroup(LV4-pGLV-EFla-EGFP-hTERTrecombinantlentiviralvector),idlinggroup(LV4-pGLV-EFla-EGFPrecombinantlentiviralexpressionvector)andthecontrolgroupSW626cells(equivalentmedium).Thenumberofcellswhichcontainedgreenfluorescentprotein(GFP)wereobservedunderfluorescencemicroscope.ExpressionofhTERTmRNAincellsweredetectedbyPCR.Results:TherecombinantlentivialvectorLV4-pGLV-EFla-EGFP-hTERTcouldgeneratedlentivirusin293Tcellsafterco-transfectionwithpackagingplasmids.mRNAexpressioninSW626cellswhichtransfectedwithLV4-pGLV-EFla-EGFP-hTERTwassignificantlyincreased.Comparedwiththecontrolgroups,LV4-pGLV-EFla-EGFP-hTERTresultedinincreasedexpressionofhTERTinthetransfectiongroup.Conclusion:TherecombinantlentiviralvectorLV4-pGLV-EFla-EGFP-hTERTcarryinghTERTgenecouldeffectivelytransfectSW626cellsandexpresshTERTproteinstablyandpermanently,whichprovidesascientificbasisforimmortalizationresearch.【Keywords】Lentiviralvector;Transfection;hTERT；Humantelomerase端粒酶是-种核糖核酸蛋白复合体，能够延长端粒末端并保持端粒长度，主要有3个亚单位组成，即端粒酶RNA、端粒酶相关蛋白及其催化亚单位端粒酶逆转录酶基因(HumanTelomeraseReverseTranscriptase,hTERT)。正常真核细胞的端粒可被称作“生命之钟”[1】。伴随端粒酶活性的增加，hTERTmRNA表达水平也相对应成-定比例---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---增加，hTERT是调控人类端粒酶活性的主要亚单位，只要hTERT表达其他亚单位就会与其共同构成高活性的端粒酶全酶［2］。慢病毒载体具有感染宿主广、基因整合率高iL稳定、性质较稳定等诸多优点［3】...