测定维生素B1含量实验条件的研究【摘要】铁氧化钾在碱性(NaOH)环境中，可以氧化维生素B1使其产生化学发光。荧光分析法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和物质含量的方法，其主耍特点是灵敏度高和选择性好。本研究项冃是在激发光365nm,发射光435nm处测岀荧光值以定量测定维牛素Bl的含量。酸性条件下的溶液中维生素B1较稳定，耐热、耐氧化，光照易分解,碱性条件下，维生素B1分解的更快。《美国药典》中在测定维生素B1的含量时采用的是人工手摇的办法混合试剂的，这个可能由于操作人员的不同造成试验误差，我们为了改进实验，采用机器振摇的办法，先做单一因素实验测定转速、放置时间、温度这几个条件，然后根据单一因素实验做正交实验确定最佳条件。尽可能的减小误差，更好的检查药品质量。【关键词】维生素B1；荧光法；正交实验中图分类号：065文献标识码A文章编号1006-0278(2015)09-119-03维生素Bl(VB1,Thiamine,别名盐酸硫胺)是人们生活中所必需的营养素之一具有调节和管制新陈代谢过程的生物活性物质，与糖代谢有密切关系。当人体缺乏维生素B1时，正常的糖代谢受阻，影响机体能量供应，使血、尿和神经组织中丙酮酸含量升高，出现感觉神经和运动神经均受影响的多发性神经炎，表现为感觉异常、神经疼痛、四肢无力，以及肌肉酸痛、萎缩和得脚气病。所以建立准确、快速、灵敏的检测方法在药理学研究等方面具有非常重要的意义。文献报道维生素B1含量测定的方法主要有：紫外-可见分光光度法、比浊法、荧光法、电化学法、毛细管电泳法和高效液相色谱法等。在NaOH碱性介质中铁氧化钾可以直接氧化维生素B1产生化学发光，而十六烷基三甲基漠化鞍的存在可以大大增强这一化学发光现象，结合流动注射分析技术，在系统优化化学发光条件的基础上，提出了一种简单、快速测定维生素B1的新方法，并将其成功应用于片剂、针剂中维生素B1的含量分析。目前荧光光度法用来测定维生素的文献报道，主要是利用氧化剂将维生素氧化，再与反应试剂发生缩合反应，生成杂氮环缩合产物，用荧光光度法來测定。维生素B1最早测定方法是先用铁鼠化钾在碱性溶液中将维生素B1氧化硫胺荧，发生明亮的蓝色荧光。任一平等利用联用技术，也就是用高效液相色谱和荧光检测结合起来测定食品中的维生素B1,方法灵敏度显著提高。本项目对采用碱性铁氤化钾氧化硫胺素为硫色素，在激发光365nm.发射光435mn处测其荧光值以定量测定维生素B1含量。通过多组实验來说明硫色素荧光法测定维生素B1含量测定的条件，给出一个较为合理的实验研究环境，使测定误差尽可能的减小。在操作过程中需要振荡90s,我们通过对摇床振摇后对放置时间和转速的测定，从而判断放置时间和溶液的混合情况是否对实验结果有影响。根据实验给出一个较为合理的转速，并说明放置时间是否对实验结果的有影响。一、实验部分(-)实验仪器与试剂1•实验仪器RF-5301pc荧光光度计（日本津岛），DC-0506恒温水浴器、Th2-C摇床，1000ml容量瓶，500ml容量瓶，250ml容量瓶，100ml容量瓶，50ml容量瓶（8支），lml、5ml、10nd吸量管，吸耳球。2.实验试剂维生素B1药片，铁氧化钾固体试剂，3.5mol/LNaOH溶液，稀乙醇溶液，0.2mol/L盐酸溶液，正丁醇。（二）实验方法1.实验前药品的配制：氧化剂的配制：称取铁鼠化钾固体0・25g于小烧杯中加水溶解，转移到25ml容量瓶中定容，从中取10ml加3.5mol/1的氢氧化钠溶液于250ml容量瓶定容，4h内使用。对照品溶液的制备：精密称取维生素B1对照品约25mg,溶于300ml的稀醇溶液（1->5）,用3mol/L盐酸溶液调节至pH4・0,加稀醇稀释成1000ml,作为贮备液。避光冷藏，每月配制一次。取贮备液适量，用0.2mol/L盐酸溶液逐步定量稀释至0.2ug/ml的溶液。供试品溶液的制备：精密称取VB1片研磨药品190mg（估计约5片），用0.加ol/L盐酸溶液溶解制成100&micro；g/ml的溶液（若供试品难溶,可在水浴上加热使溶解），精密量取5ml,逐步定量稀释至0.2ug/ml的溶液。2.测定方法：取一支50ml容量瓶精密加入对照品溶液5ml,在容量瓶中迅速加入氧化剂3.0ml,在30s内加入正丁醇20.0ml,剧烈振摇90s。根据单一因素实验分别改变温度、转速操作后，再加入2・0nd乙醇，...