三株产乳酸芽孢杆菌共生培养胞外代谢产物的活性与成分分析钟日聪++刘影++徐春厚摘要：对3株产乳酸芽孢杆菌共生培养产生的胞外代谢产物的活性与化学成分进行了初步研究，用杯碟法测定代谢产物的抑菌活性，用气相色谱质谱仪（GC/MS）分析代谢产物的成分。结果表明，3株菌共生培养产生的胞外代谢产物有抑菌活性，对革兰氏阳性菌的抑制作用强；胞外代谢产物中，4-叔丁基-2，6-二甲基-3，5-二硝基苯乙酮相对含量最高，为11.16%；其次是开司米酮（5.13%）和烯丙基苯酚（4.02%）；初步确定的抑菌物质为烯丙基苯酚，芳香类物质为4-叔丁基-2，6-二甲基-3，5-二硝基苯乙酮和开司米酮。关键词：芽孢杆菌；共生培养；代谢产物；抑菌物质；芳香物质：S816.7文献标识码：A：0439-8114（2017）05-0915-04DOI：10.14088/jki.issn0439-8114.2017.05.031AnalysesontheActivityandCompositionofExtracellularMetabolitesfromSymbioticCultureLiquidofLacticacidBacillusStrainSC，SL1andTRZHONGRi-cong1，LIUYing2，XUChun-hou2（1.GuangdongGuangkenAnimalHusbandryCo.，Ltd.，Guangzhou510612，China；2.AgriculturalCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhan激ang524088，Guangdong，China）Abstract：TheantibacterialactivityandchemicalcompositionofextracellularmetabolitesproducedbytheLacticacidBacillusstrainSC，SL1andTRonsymbioticculturewerestudiedusingthemethodofcupdishandgaschromatography-massspectrometer.TheresultsshowedthatantibacterialsubstancesexistedintheextracellularmetabolitesproducedbythreeBacillusonsymbioticculture，ithadstrongbacteriostaticactiontogrampositivebacteria.Intheextracellularmetabolites，the4-tert-butyl-2，6-dimethyl-3，5-dinitroacetophenonewasthehighestintherelativeamount，for11.16%，followedbycashmeran（5.13%）andallylphenol（4.02%）.Allylphenolwaspreliminaryidentifiedastheantibacterialsubstances，4-tert-butyl-2，6-dimethyl-3，5-dinitroacetophenoneandcashmeranwerethearomaticsubstances.Keywords：Bacillus；symbioticculture；metabolite；antibacterialsubstance；aromaticsubstance微生態制剂具有调节肠道功能紊乱、抑制病原菌繁殖、维持肠道内菌群平衡、促进机体生长和提高免疫力等作用[1，2]，且能够解决服用抗生素带来的耐药性、二重感染及药物残留等问题，已被广泛用于畜牧、水产养殖及饲料等行业[3-7]。微生态制剂的制备需要益生菌，而产乳酸芽孢杆菌是一类既能产生乳酸又能形成芽孢的革兰阳性杆菌，同时具有乳酸菌和芽孢杆菌的优点，已成为最理想的益生菌之一[8]。芽孢杆菌SC、蜡状芽孢杆菌SL1和芽孢杆菌TR是徐春厚等[9]分离鉴定的益生菌，为了探讨3株产乳酸芽孢杆菌共生培养时的胞外代谢产物的活性及其化学成分，进行了抑菌试验和气相色谱质谱仪（GC/MS）分析，以期为3株益生菌的开发应用提供参考。1材料与方法1.1供试菌株芽孢杆菌SC（Bacillussp.sc，FJ627944）、蜡状芽孢杆菌SL1（BacilluscereusSL1，FJ627945）和芽孢杆菌TR（Bacillussp.TR，FJ627946），3株菌均产生乳酸和形成芽孢，由广东海洋大学预防兽医学实验室分离、鉴定和保存。1.2培养基1.2.1GYP培养基蛋白胨5g/L，酵母粉5g/L，葡萄糖20g/L，pH7.2，121℃灭菌20min。1.2.2发酵培养基10%黄豆汁100mL/L，白糖80g/L，K2HPO41.5g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O0.6g/L，MnSO4·H2O0.1g/L，115℃灭菌20min。1.3指示菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大肠埃希菌（Escherichia.coli）、鸡白痢沙门菌（Salmonellapullorum）、多杀性巴氏杆菌（Pasteurellamultocide）和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），购于中国兽医药品监察所。1.4芽孢杆菌共生培养液的制备用GYP培养基分别活化3株产乳酸芽孢杆菌，按5%接种量和1∶1∶1的接种比例，同时加入的接种顺序，接种到发酵培养基中，37℃、150r/min振荡培养24h，再静置培养24h；将培养物4000r/min离心20min，收集上清液，微孔滤膜过滤，滤液即为3株芽孢杆菌共生培养液；将未接菌的发酵培养基同...