不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析赵志英1刘振波2（1湖南省桃江县疾病预防控制中心湖南益阳413400）（2湖南省益阳市资阳区大潭口血防站湖南益阳413000）【】R521【文献标识码】A【】1672-5085（2013）18-0137-02【摘要】目的比较不同检测方法检测痰液标木结核分支杆菌的检测效果。方法80份拟诊为肺结核患者的痰液标木分别采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测，并对其检出率进行比较。结果RT-PCR法、菌培养法、染色法的检出率分别为93.75%、71.25%、56.25%。RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法，菌培养法检出率高于染色法。结论荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便快速、敏感、特异的检测，值得推广应用。【关键词】结核分枝杆菌痰液标木涂片抗酸染色法菌培养法荧光定量法（RT-PCR）肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，严重威胁人类的健康，是单病因所致的感染性疾病中死亡率最高的疾病。从痰液中检测结核分枝杆菌检查对肺结核早期诊断、发现传染源、确定治疗方案及观察疗效等意义重大。木文运用三种方法对80份拟诊为肺结核患者的痰液标木进行检测，并对其检出率进行比较，以期为临床提供更科学有效的检测方法。1材料与方法1.1标木采集选择拟诊为肺结核的患者痰液标木80份，瞩患者清晨用生理盐水嗽U,咳痰，第一口痰弃去，取深部咳痰三口分装于3个无菌细菌培养标木盒内送检。1.2试剂与仪器显微镜、萋-尼氏染色试剂（按文献［1］的方法自行配制）、痰消化液、pH6.8的磷酸盐缓冲液、结核分枝杆菌PCR荧光定量检测试剂盒、DA7600荧光定量PCR仪、低温高速离心机、生物安全柜、BacT/ALERT3D全自动分枝杆菌培养检测系统等。1.3标本检测方法1.3.1涂片抗酸染色法所有操作严格按照《抗酸杆菌涂片检査操作程序》（中国疾病预防控制中心结核病防治临床中心与国家结核病参比实验室制订）进行。1.3.2快速结核菌培养法取适量痰标本，采用痰消化液消化。视标本性状，加1〜2倍体积的处理液于无菌痰杯中，使痰液充分液化，加入磷酸盐缓冲液震荡，低温离心机离心，取沉淀加0.2%牛血清ImL,混匀孵育。取0.5mL加入到无菌BacT/ALERT3D培养管（预先以75%乙醇消毒瓶口，待自然风干后，加入0.5mL抗生素补充剂），以上操作均在生物安全柜内进行。1.3.3荧光定量PCR技术取痰标本，加入痰消化液室温液化30min,取适量液化后痰液标本，高速低温离心。弃上清液，沉淀用无菌生理盐水ImL打匀，低温离心，重复洗涤1次，再次低温离心，弃上清液，沉淀加入DNA提取液，充分混匀后沸水浴lOmin,高速离心10ml,取0.5ml样本加入到PCR管内，设置反应体系，扩增完计算机自动分析，建立标准曲线，计算出标本中扩增片段的拷W数。1.4统计学处理数据处理采用SPSS16.0统计学软件处理，计数资料采用X2检验，计量资料采用t检验。2结果RT-PCR法结核分枝杆菌检出率高于染色法及菌培养法，菌培养法检出率高于染色法。详细数据见表1。表1三种检测方法痰结核分枝杆菌检出率检测方法例数n检出例数(％)染色法8045(56.25)菌培养法8057(71.25)RT-PCR法8075(93.75%)注：RT-PCR法与染色法、菌培养法比较，P<0.05；染色法与菌培养法比较，P<0.05；均有显著性差异。3讨论肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，严重威胁人体健康。检査痰液中是否含冇结核杆菌，是临床诊断或鉴别肺结核的重要依据。痰液中结核杆菌的检查方法，通常采用涂片抗酸染色法和快速结核菌培养法。染色法检测阳性率低，灵敏度和特异性也较差，检测结果受送检标本质量的影响，常出现漏检情况，菌培养法所需吋间较长，阳性率较低，不利于肺结核的早期诊断和及吋治疗［2］。近年来，结核病的分子生物学诊断技术发展迅速，其中聚合酶链反应PCR因其技术成熟，已广泛应用于临床。它是一种以核酸生物化学为基础的分子生物学诊断技术，传统PCR技术在临床应用有一定局限性，荧光定量PCR技术克服了传统PCR技术易污染、假阳性率高的缺点，具奋操作简单、结果可靠、重复性和特异性好、灵敏度高、可定量等优点。本组研究资料表明，荧光定量PCR技术检测的阳性率为93.75%,明显高于涂片抗酸染色法和菌培养法，...