荧光原位杂交技术及染色体核型分析在产前诊断中的应用价值【摘要】目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)及染色体核型分析在产前诊断中的临床应用价值。方法抽取90例妇产科就诊孕妇的羊水进行体外培养并进行染色体核型分析，其中对45例羊水样本应用荧光原位杂交技术，直接对间期核细胞进行13、18、X、Y等染色体数目进行检测。结果90例羊水样本有88例样本完成染色体核型分析，诊断成功的几率为97.78%,其中2例患者出现异常染色体核型的情况，占2.22%,报告的时间平均为(23.49土5.11)do在应川荧光原位朵交技术的45例样本中，诊断成功的几率为100.00%,其中有8例患者出现异常染色体核型的情况，占&89%,其中，结构异常5例，数冃异常3例。另外，在染色体数目的诊断上，荧光原位朵交技术与染色体核型分析的诊断结果一致，平均报告的时间为(2・78±4.13)do结论荧光原位杂交技术应用于产前诊断中具有成功率、准确性高的特点，能够有效缩短报告的时间，但是对于某些情况特殊的患者來说，单纯地使用荧光原位杂交技术则有可能造成漏诊的现象发生，因此荧光原位杂交技术并不能完全取代染色体核型分析技术，在必要时需要同时使用两种技术。【关键词】荧光原位杂交技术；染色体核型分析；产前诊断；临床应用价值D0I：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.12.057为了探讨光原位杂交技术及染色体核型分析在产前诊断中的临床应用价值，本院特进行了一次研究，取得了较为良好的效果，现将具体情况报告如下。1资料与方法1.1一般资料选取梅州市人民医院妇产科就诊的孕妇90例作为研究的主要对象，年龄最小19岁，最大47岁，平均年龄(32.74±5.87)岁，高龄孕妇(年龄252岁)18例、血清学筛查异常20例、Down's高风险16例、胎儿畸形17例、不良孕产史19例。1.2诊断方法本次研究中所需要用到的仪器有：染色体核型分析系统、荧光原位朵交(FISH)分析系统、荧光显微镜、杂交仪、电热恒温水浴箱、普通低速离心机、二氧化碳恒温培养箱、微量加样器等。抽取所有孕妇的羊水进行体外培养并进行染色体核型分析，其中对45例羊水样本应用荧光原位杂交技术。在B超定位的引导下，经腹部性羊膜腔刺穿术，抽取羊水35ml,其中30ml羊水用于细胞培养，5ml羊水准备FISH实验，羊水细胞离心后放置在无菌玻璃试管内备用。以下是荧光原位杂交技术的相关步骤。1.2.1制备样本玻片取2〜5ml羊水,2000r/min,离心10min,去上清制成细胞悬液，留沉淀0.2mlo在离心管中加入5ml预温的0.075mol/LKC1,并且在37°C水浴中低渗30min。离心10min后去上清,加入用甲醇和冰醋酸新配制的固定液两者的比例为3：1,进行10min的预固定，重复上述离心步骤，重复固定2次，10min/次。让滴片自然干燥后放置在-20°C冰箱进行保存。1.2.2进行变性杂交主要的过程为：选择13号、18号、21号、X、Y染色体特异性探针。将按照上述步骤制备好的羊水、绒毛玻片自冰柜中取出，依次放入70%、85%、100%乙醇中进行脱水处理。用10口1橘红色的探针在玻片的杂交区域滴加混合物，并且在靶区域盖上盖玻片，避免产生气泡。值得注意的是，这一系列的过程需要在暗室中操作。最后用橡胶泥将盖玻片封好，放置在37°C的暗湿盒中杂交16h[l]。1.2.3进行玻片的洗涤工作去掉盖玻片，用SSC溶液进行漂洗、乙醇漂洗。另外需要在暗室中将其进行自然风干，并且加6n1DAPII复染。在靶区域加盖玻片。1.2.4对结果进行观察应用荧光显微镜，激发光滤片、图像分析系统在镜下观察杂交效果。细胞杂交率在80%以上为有效标本。另外，在判定的过程中需要注意细胞核膜是否完整。在细胞核内可见清晰明亮的桔红色荧光信号，需要根据荧光点直接的大小来记录数量。例如，出现2个或3个荧光点，并且2个位点之间灰离〉单个信号的直径以上，荧光强度相近，计为含有2条或3条染色体。两个信号Z间的距离〈1个信号的直径则计数为1条染色体。记录杂交信号数目并录入图像分析仪。1.3观察指标观察13、18、X、Y等染色体数目、报告平均时间和诊断的成功几率。1.4统计学方法采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数土标准差(x-土s)表示，采用t检验；计数资料以率(%)表示，采用x2检验。P<0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1诊断的成功...