亮甲酚蓝优选哺乳动物卵母细胞技术研究进展摘要随着动物胚胎工程技术的不断发展，卵细胞的需求量不断增大。卵母细胞的质量决定植入前早期胚胎发育的效率，为此筛选出优质卵母细胞对于提高后纟卖胚胎的发育起着决定性的作用。本文就亮甲酚蓝染色筛选成熟培养前的卵母细胞，对于卵母细胞质量、后续胚胎发育效率和早期胚胎发育相关基因表达的影响方面的研宄予以综述，期望对于同行有一定的借鉴意义。关键词亮甲酚蓝；卵母细胞；胚胎发育；胞质成熟S813.3文献标识码A1007-5739(2016)08-0238-01AbstractWiththecontinuousdevelopmentofanimalembryoengineeringandtechnology，thedemandofoocytesisincreasingalot.Oocytequalitycanaffecttheefficiencyofearlyembryonicdevelopment，soitplaysadecisiveroleforsubsequentembryonicdevelopmentthroughselectinghigh-qualityoocytes.Inthispaper,theeffectsofBrilliantCresolBluestaining（BCB）onfurtherembryodevelopmentwerereviewed，whichincludedthequalityandefficiencyofsubsequentembryonicdevelopmentandtheinfluenceofgeneexpressionofearlyembryo.ltwasexpectedthatitwouldbehelpfulfortheirpeersintheearlyembryodevelopmentresearchfields.Keywordsbrilliantcresylblue（BCB）；oocyte；embryodevelopment；cytoplastmaturation生长期的卵母细胞代谢旺盛，含有大量的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH），但是随着卵母细胞的生长期结束其活性也逐渐降低直至消失，因此卵母细胞成熟时G6PDH的含量很少。卵母细胞经过采用亮甲酚蓝（BCB）染色，由于G6PDH可以使BCB由原来的蓝色变成无色，因此可以分辨出生长期的卵母细胞和成熟的卵母细胞，前者表现为胞质未着色（BCB-），而后者则胞质呈蓝色（BCB+）。因此，BCB染色技术己经被广泛用于多种动物卵母细胞的筛选，并取得了很好的效果［1-4］。此外，己有的研究认为，处于生长阶段的卵母细胞的发育能力远低于成熟期的卵母细胞，因此通过BCB染色技术还能够间接的评估卵母细胞的质量。通过采用BCB对成熟培养前的猪［1-2］、山羊［3］、绵羊［5］和牛［6-7］卵母细胞染色用于检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶间接评价优选卵母细胞，为后续研宄提供优质卵母细胞。有研宄发现未着色的卵母细胞培养成熟后，用于核移植具有更高的体外囊胚发育率［8-9］。在动物胚胎生产中，主要从屠宰场采集卵巢，由于挑选的卵母细胞来自不同生长阶段的卵泡，导致了卵母细胞质量存在差异。本文就BCB在筛选成熟培养前的卵母细胞后，对于卵母细胞质量、后续胚胎发育效率和早期胚胎发育相关基因表达的影响方面的研宄予以综述，期望对于动物胚胎工程研究领域的同行有一定的借鉴意义。1BCB筛选卵母细胞质量的研究在BCB筛选小鼠卵母细胞的研宄方面，有研究发现［10］，BCB+组的卵母细胞染色体周围核仁的数量较多，并且其胞质成熟较充分(通过GSH水平和线粒体的分布方式)，成熟后期具有较好的发育潜力。这个结论已经在很多动物中卵母细胞筛选中得到证实，概述如下。(1)在BCB筛选牛卵母细胞的研宄方面，有研究发现：用26、39、52umol/L的亮甲酚蓝染色后所得到的BCB+组(27.7%、27.6%、31.9%),较13umol/L的亮甲酚蓝染色后所得到的BCB+组(2.1%)差异显著，而且其BCB染色后，BCB+组的体外成熟率（77.4%）显著高于BCB-组（51.3%）和对照组（60.2%）［11］。（2）在BCB筛选猪卵母细胞的研究方面，有研究发现：BCB+组卵母细胞的核成熟率（80.8%）显著高于BCB-组（44.2%）和空白对照组（72.4%）［12］。此外，在通过BCB染色提高猪体外胚胎培养体系的效率的研宄中发现［13］:BCB+组的猪卵母细胞的91.16%己经达到减数分裂II期，显著高于BCB-组（64.10%）和对照组（77.15%）。（3）在BCB筛选山羊卵母细胞的研究方面，有研宄发现：BCB+和BCB-组的卵母细胞的平均直径分别为136.6、125.5urn,可见BCB+组的卵母细胞显著长于BCB-组（P综上可见，以亮甲酚蓝染色为基础的卵丘一卵母细胞复合体的区分可以用来有效地选择更具发育活力的卵母细胞，其后续构建的胚胎具有更大的发育潜力。因此，亮甲酚蓝可用于卵母细胞染色的选择，并作为判断卵母细胞质量的一...