一株粘细菌Myxococcussp.STXZ90的分离鉴定及生物活性分析黄同龙++雷良欢++廖继燕++周偲++吴雨婧++李纯++魏慧++夏立秋++丁学知++张友明DOI：10.7612/j.issn.10002537.2017.02.004摘要采用灭活大肠杆菌诱导法分离粘细菌，通过形态观察、生理生化实验、16SrRNA基因序列同源性分析，对其进行鉴定并归类.并通过平板对峙法、肿瘤细胞毒性实验等检测粘细菌代谢产物的抑菌和抗肿瘤活性，RPHPLC分离抗肿瘤活性物质.分离得到一株粘细菌，鉴定结果表明该菌株为黄色粘球菌，将其命名为Myxococcussp.STXZ90（简写为STXZ90）.抑菌试验表明，STXZ90对多种人类病原菌及鱼类致病细菌如产气肠杆菌、嗜水气单胞菌等具有较高的抑制活性；STXZ90发酵上清的甲醇粗提物对多种肿瘤细胞具有广谱高效的抑制肿瘤细胞活性，对Hep3B，Hela和HUVEC等的最低半抑制浓度（IC50）为0.279～1.228mg/L.对该甲醇粗提物进行RPHPLC分离，得到2个较纯的单峰物质，体外肿瘤细胞实验结果显示该组分有较强的抑制肿瘤细胞活性.关键词粘细菌；次级代谢产物；高效液相色谱Q939A10002537（2017）02002508OnIsolation，IdentificationandBioactivitiyofMyxococcussp.STXZ90HUANGTonglong，LEILianghuan，LIAO激yan，ZHOUCai，WUYu激ng，LIChun，WEIHui，XIALiqiu，DINGXuezhi，ZHANGYouming*（StateKeyLaboratoryBreedingBaseofMicrobialMolecularBiology，CollegeofLifeScience，HunanNormalUniversity，Changsha410081，China）AbstractTheinactivatedEscherichia.colidependentfruitingbaitingtechniquewasusedtoisolatemyxobacterialstrains.Basedonthephylogeneticalcharacteristics，physiologicalandbiochemicalpropertiesand16SrRNAgenesequencehomologyanalysis，theisolatedstrainhasbeenidentifiedandclassified.TheinhabitationofthestraintodifferentpathogensandtumorcellsweredetectedbythePlateConfrontationCultureMethodandtumorcelltoxicityexperiment.TheantitumorsubstancewasfurtherpurifiedbyRPHPLC.OurresultsshowedthatthestrainbelongedtomyxococcusxanthusandthusitwasnamedasMyxococcussp.STXZ90（STXZ90）.TheantibacterialexperimentindicatedthatSTXZ90hadbacteriostaticactivitytodifferenthumanpathogensandfishpathogens，suchasEnterobacteraerogenes，andAeromonashydrophil.ThemethanolelutionofthefermentedsupernatantofSTXZ90exhibitedabroadspectrumandhigheffectonvarioustumorcelllines.TheIC50（halfmaximalinhibitoryconcentration）toHep3B，Hela，andHUVECwerebetween0.279to1.228mg/L.ThemethanolelutionwasfurtherpurifiedbyRPHPLCwith2singlepeakfragmentsobtained，whichdisplayedstronginhibitoryactivitiestocancercells.KeywordsMyxobacteria；secondarymetabolite；HPLC粘細菌（myxobacteria）是土壤中较为常见的一类单细胞革兰氏阴性细菌，营养细胞杆状，具有复杂的多细胞行为，可以滑行运动，能产生结构各异、种类多样、活性高效的次级代谢产物，在农业、医药、生态环境等方面具有重要的研究应用价值[19].据Dawid报道，在2000多株溶细菌的粘细菌中，有55%能产生生物活性物质；在700多株溶纤维素的粘细菌中，有95%可产生生物活性物质[10].安布替星（ambruticin）是粘细菌的第一个确定化合物结构的生物活性物质，分离自纤维堆囊菌（Sorangiumcellulosum）的次级代谢产物，具有抗真菌作用，可用于麻醉药及其辅助用药[11].抗生素TA是1973由Rosenberg等[12]从粘细菌中分离得到的第一个抗生素，来自橙色粘球菌（Myxococcusfulvus）的次级代谢产物.纤维堆囊菌产生的epothilons是与紫杉醇具有相同作用机制的十六元聚酮大环内酯化合物，是一种很好的抗癌新药，对乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等都有很好的抑制效果，且IC50（最低半抑制浓度）都在纳摩尔水平[13].粘细菌的次级代谢产物种类丰富，大部分具有抑菌、抗肿瘤活性，是新型生物活性物质的[1415].本研究对分离纯化的粘细菌进行形态观察、菌种鉴定分类归属，丰富了粘细菌菌种资源，同时为今后粘细菌的分离纯化和次级代谢产物中新...