甘草甜素对CYP1A2酶体外活性影响研究郑姣宁宁(通讯作者)(湖南省人民医院科研办<湖南师范大学第一附属医院科研办>湖南沙410005)【摘要】目的:研宄甘草甜素(glycyrrhizin)体外对细胞色素P450酶亚型CYP1A2活性的影响。方法：以咖啡因为探针药，采用高效液相色谱法测定探针药与相应代谢产物的浓度，研宄甘草甜素在人肝微粒体孵化体系和重组酶体系中对CYP1A2活性的影响。结果：在人肝微粒体反应体系中，0.1,0.2,0.4,0.8mmol?L-l甘草甜素使咖啡因的代谢产物的牛.成分别降低了31±15%(p=0.007)、43±8%(p=0.012)、48±6%(p=0.037)、49±4%(p=0.029)；在体外重组酶反应体系中，0.1，0.4mmol?L-l甘草甜素使咖啡因的代谢产物的生成分别降低了48±9%(p=0.012)>82±8%(p=0.004)o结论：甘草甜素对CYP1A2酶体外活性有较明显的抑制作用;随着甘草甜素浓度的增高，抑制作用也相应增强。【关键词】甘草甜素肝微粒体重组酶CYP1A2【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2014)11-0273-02[Abstract]Objective:ToinvestigatetheeffectofglycyrrhizinonCYPlA2activityinvitro.Method:Caffeine(aCYP1A2substrate)wasusedasprobe.TheconcentrationsoftheprobedruganditsmetaboliteweredeterminedbyHPLC.TheeffectofglycyrrhizinonactivityofCYP1A2wasdetectedthroughhumanmicrosomesandrecombinantenzymereactionsysteminvitro.Results:GlycyrrhizininhibitedtheactivityofCYPlA2invitro.Inhumanlivermicrosome,O.lmM,0.2mM,0.4mM,0.8mMglycyrrhizindecreasedtheactivitiesofCYPlA2by31±15%(p=0.007),43±8%(p=0.012),48±6%(p=0.037),49±4%respectively.Inrecombinantenzymereactionsystem,O.lmM,0.4mM,glycyrrhizindecreasedtheactivitiesofCYPlA2by48±9%(p=0.012)、82±8%(p=0.004).Conclusion:GlycyrrhizininhibitedtheactivityofCYP1A2inadose-dependentfashioninvitro.【Keywords】glycyrrhizinhumanmicrosomesrecombinantenzymecytochrome1A2甘草甜素是从甘草中分离得到的三蔽类成分，又称甘草酸(glycyrrhezicacid),分子式为C42H62O16。以甘草甜素为主要成分的制剂如复方甘草甜素片，复方甘草甜素注射剂等由于具有抗病毒、抗肿瘤，免疫调节，类糖皮质激素及清除氧自由基等明确的药理作用，因而在临床上用于急性、慢性肝炎、湿疹、荨麻疹及过敏性皮肤病、药物疹和嗜酸性粒细胞增多症等疾病的辅助治疗［1】。甘草甜素的副作用较少，常见副反应主要是低血钾和高血压等假醛固醇增多症。由于甘草甜素各类制剂作为辅佐用药，应用广泛、用药吋间较长，甘草甜素与其他药物合用的机会相当常见。不良药物作用相应增多，例如：甘草甜素与降压药、利尿剂和降血糖药合用可使相应症状加重，与水合氯醛联用，可拮抗其镇静和催眠作用，诱发洋地黄中毒［2】。近年有研究表明甘草甜素对于大鼠CYP450S有明显的影响［3］，为探讨甘草甜素对人类药物代谢酶的影响，明确该药与K他药物相互作用的理论基础，本研究以咖啡因为探针药，采用高效液相色谱法测定探针药与相应代谢产物的浓度，在体外研宄人肝微粒体反应体系和人重组酶反应体系中甘草甜素对CYP1A2酶活性的影响。1材料和方法1.1药品与试剂咖啡因(137X)、1，7-二甲基黄嘌呤(17X)、β-羟基乙基茶碱(HT)、甘草甜素、小牛血清白蛋白、重组酶CYP1A2、葡萄糖一6—磷酸(G—6—P)、葡萄糖一6—磷酸脱氢酶(G—6—PDH)、辅酶ll(β-NADP)购自Sigma公司(St.Louis,Mo,US)。乙腈、甲醇为色谱纯，•其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。1.2仪器PCR仪(PerkinElmerCetus,USA)，电泳仪(北京六一仪器厂)，紫外凝胶成像系统(美国上岛公司)，恒温水浴箱(HetoHoltenDenmark)，岛津2010高效液相色谱仪，匹配紫外检测器，荧光检测器，安吉能2100高效液相色谱仪，匹配紫外检测器，色谱柱为SumHpersilC18柱(4.6mm×250mm)，SumDiamonsilC18柱(4.6mm×250mm)，HibarRT柱(4.6mm×150mm)。1.3试验方法1.3.1肝脏标本的收集及肝微粒体的制备本研宄经湖南省人民医院伦理委员会批准...
