FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品科技2010年第35卷第12期纤维素酶是具有纤维素降解能力酶的总称,其应用非常广泛,如蔬菜加工,果汁及粮食加工、天然有效成分的提取、饲料、造纸、纺织工业、采油工程、废水处理以及能源制造等方面[1-3]。目前纤维素酶的分离纯化多采用盐析、凝胶色谱等方法。双水相体系萃取具有条件温和,产品活性损失少,处理量大,设备投资小,操作简单,易于放大及连续操作等优点,广泛应用于蛋白质、酶、核酸及多糖等生物大分子的分离纯化[4]。本课题以商业粗酶制剂为酶源,研究PEG浓度、硫酸铵浓度及pH对PEG4000/(NH42SO4双水相体系萃取纤维素酶的影响,以确定合适的萃取条件。1材料与方法1.1材料纤维素酶:杭州绿柔生物科技有限公司;羧甲基纤维素钠:上海精析化工科技有限公司;聚乙二醇4000:天津科密欧化学试剂开发中心。1.2方法1.2.1纤维素酶活力测定以柠檬酸-硫酸氢二钠Extractionofcellulasebyaqueoustwo-phasesystemSHUGuo-wei,WANGChang-feng,CHENHe,YANGZhi-wei(CollegeofLifeScienceandEngineering,ShaanxiUniversityofScienceandTechnology,Xi'an710021Abstract:Theeffectsofconcentrationofpolyethyleneglycol,ammoniumsulfateandpHonextractionofcellulasefromindustrialcellulaseinaqueoustwo-phasesystemofPEG-4000andammoniumsulfatewerestudied.Theresultsshowthat:Theconditionsofaqueoustwo-phasesystemsextractionareasfolows:concentrationof(NH42SO4is8%,concentrationofPEG400026%,pH4.8,ThepartitioncoefficientKandtherecoveryratewere5.21and79.4%respectively.Keywords:cellulase;aqueoustwo-phasesystems;partitioncoefficient舒国伟,王长凤,陈合,杨志伟(陕西科技大学生命科学与工程学院,西安710021摘要:研究了聚乙二醇4000-硫酸铵(PEG4000/(NH42SO4双水相体系中,PEG浓度、硫酸铵浓度及pH对从商品纤维素酶样品中萃取纤维素酶的影响。结果表明:双水相体系的质量组成为(NH42SO48%,PEG400026%,pH4.8时,分配系数K为5.21,萃取率为79.4%。关键词:纤维素酶;双水相;分配系数中图分类号:O658.2文献标志码:A文章编号:1005-9989(201012-0191-03双水相体系萃取纤维素酶的研究收稿日期:2010-04-15基金项目:陕西省科技攻关项目(2007JK01-13-2;咸阳市科技攻关项目资助(K0311-2。作者简介:舒国伟(1977—,男,四川内江人,硕士,讲师,研究方向为功能性食品及酶工程。提取物与应用·191·FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY食品科技2010年第35卷第12期(0.2mol/L,pH4.4缓冲液配制0.625%CMC-Na底物溶液。取0.5mL酶液与2.5mL底物溶液50℃水浴保温30min,测定反应后还原糖含量,同时做空白对照。酶活定义为在上述条件下,1h产生1mg葡萄糖的酶量为1个酶活力单位(U[5]。1.2.2双水相萃取参考文献[6]。1.2.3萃取率的计算[7]y=RK/(1+RK式中:y为萃取率;R为相比,R=Vt/Vb,Vt和Vb分别是上相和下相的体积;K为纤维素酶的分配系数,K=Ct/Cb,Ct和Cb表示上下相的酶活。2结果与分析分别取不同体积的标准葡萄糖液于25mL比色管中,加水至1.0mL,再加入3mLDNS溶液。在沸水浴中蒸煮5min,立即冷却,定容后摇匀,以不加葡萄糖的溶液作对照,在500nm测定其测吸光度,以葡萄糖浓度对吸光度作图,结果见图1。由图1可知,标准曲线方程为:y=0.2447x-0.1367,相关系数R2=0.9972,即在1~3.5mg/mL范围内葡萄糖浓度和吸光度有着良好的线性关系。2.1盐浓度对相比R(Vt/Vb影响在聚乙二醇PEG4000/(NH42SO4双水相体系中,当PEG浓度为18%,pH4.8,T=20℃条件下进行,不同浓度(NH42SO4下相比R变化见图2。由图2可知,在聚乙二醇PEG4000/(NH42SO4双水相体系中。当聚乙二醇PEG浓度保持一定条件下,相比R(上相体积/下相体积随硫酸铵盐用量增加而减小。2.2PEG浓度对相比R的影响在聚乙二醇PEG4000/(NH42SO4双水相体系中,当(NH42SO4浓度为16%,pH4.8,T=20℃条件下进行,不同浓度PEG下相比R变化见图3。由图3可知,在聚乙二醇PEG2000/(NH42SO4双水相体系中。当(NH42SO4浓度保持一定条件下,相比R(上相体积/下相体积随聚乙二醇用量增加而增大。由萃取率y=RK/(1+RK可知,为了提高萃取率,需要同时考虑分配系数K和相比R这2个参数。2.3(NH42SO4浓度对萃取的影响在聚乙...