米非司酮对小鼠植入前胚体外发育的影响及机制研究

米非司酮对小鼠植入前胚体外发育的影响及机制研究张燕琴(泉州医学高等专科学校福建泉州362011)【摘要】目的:探讨米非司酮对小鼠植入前胚体外发育的影响及作用机制。方法:体外培养小鼠2-细胞胚,实验分M16对照组、米非司酮组(2.5,5,1020&mu;mol/L);比较各组囊胚发育率;检测囊胚三磷酸腺苷(ATP)和囊胚内氧化应激活性氧(ROS)水平。结果:M16体外培养48h后囊胚发育率为83.47%,明显高于10和20&mu;mol/L米非司酮组(P<0.05);培养72h后M16对照组囊胚发育率为85.95%,显著多于10和20&mu;mol/L米非司酮组(PC0.01);10&mu;mol/L米非司酮组囊胚发育率S著多于20&mu;mol/L米非司酮组(P<0.05);M16对照组囊胚ATP含量明显高于10和20&mu;mol/L米非司酮组(P<0.01);10&mu;mol/L米非司酮组囊胚ATP含量高于20&mu;mol/L米非司酮组;M16对照组囊胚内ROS相对荧光密度值明显低于10和20&mu;mol/L米非司酮组(PC0.01);10和20&mu;mol/L米非司酮组间囊胚内ROS相对荧光值比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:10和20&mu;mol/L米非司酮可降低囊胚ATP含量和增加ROS水平,抑制植入前胚发育。【关键词】米非司酮;植入前胚;三磷酸腺苷;活性氧【中图分类号】R961【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2015)8-0470-02StudyofMechanismandeffectsofMifepristoneonmousepreimplantationembryodevelopmentinvitroYanqinZhangQuanzhouMedicalCollege,Quanzhou,Fujian362011【Abstract】ObjectiveStudyofMechanismsandeffectsofMifepristoneonmousepreimplantationembryodevelopmentinvitro.Methods2-cellembryosfrommousewereculturedwithM16andMifepristone.Thenumberofblastaedwascomparedindifferenttimes.ATPlevelsandROScontentsofblastaedweremeasured.ResultsThedevelopmentofblastaedinM16controlgroupas83.47%wassuperiorto10and20&mu;mol/LMifepristongroup(P<0.05).Afterculturedfor72h,thedevelopmentofblastaedinnormalsalineas85.96%wassuperiorto10and20&mu;mol/LMifepristongroup(P<0.01),and10&mu;mol/LMifepristonewashigherthan20&mu;mol/L(P<0.05).ATPlevelofblastaedinM16groupwashigherthan10&mu;mol/Land20&mu;mol/LMifepristone(P<0.01).10&mu;mol/Lwashigherthan20&mu;mol/L(P<0.01).TherelativefluorescenceintensityforROSin10and20&mu;mol/LgroupswashigherthanM16(P<0.01).ROSin20&mu;mol/Lwashigherthanthe10&mu;mol/L(P<0.01).Conclusion10and20&mu;mol/LMifepristonecouldreduceATPlevelandincreaseROSinblastaed,andinhibitsdevelopmentofpreimplanatationembryo.【Keywords】Mifepristone;preimplantation;ATP;ROS当前,不孕不育、自然流产以及出生后缺陷等发病率逐年升高[1],生殖功能受多种因素影响,其中环境雌激素近年得到广泛关注。米非司酮(Mifepristone)为人工合成药用雌激素,对大鼠早期胚胎发育在形态结构和细胞分裂上无明显作用[2】。然而,国外研究认为米非司酮对胚胎早期发育有显著抑制作用[3】。因此,米非司酮是否明显影响胚胎早期发育尚存在争议。本研究常规植入前胚体外培养,对囊胚体外发育行米非司酮干预,检测米非司酮对囊胚内三磷酸腺苻(ATP)含量和氧化应激活性氧(ROS)的影响。1材料与方法1.1实验动物雌性C57BL/6小鼠和雄性C3H/He小鼠购自上海斯莱克实验动物冇限公司(雌鼠4〜6w,雄鼠8w以上);B6C3H雌鼠由上述饲养的雌雄鼠杂交所得;所奋动物在恒温(21&plusmn;l)°C和恒湿(55%&plusmn;5%)条件下饲养;自由取食饮水;光周期调控:12h/12h。1.2实验试剂和仪器米非司酮片(山东端信堂大禹药业有限公司,国药准字H20083077);人绒毛膜促性腺激素(hCG)购自美国Sigma公司;孕马血清促性腺激素(PMSG)购自以色列ProSpecTechnoGene公司;M2、M16培养液购自北京迈晨公司;其•他体外培养所需常规试剂购自美国Sigma公司;恒温C02培养箱(371型,ThermoForma公司);超浄工作台(BCN-1360B,哈尔滨东联公司);倒置相差显微镜(OLYMPUS,IX70-S8F)。1.3实验方法1.3.1小鼠植入前胚体外培养[4]B6C3F1雌性小鼠腹腔注射6IUPMSG,46〜48h后注射6IUhCG,随后与KM雄性小鼠1:1合笼(早B6C...

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