园艺学报，（）：–2014411224372445wwahs.acActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126收稿日期：2014–07–31；修回日期：2014–12–08基金项目：国家自然科学基金项目（31101576）；中央高校基本科研业务费专项基金项目（2013PY090）；教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目（20110146120040）矮牵牛B-box型锌指蛋白基因PhBBX8的克隆与表达分析宁露云，李蓓，李佩，包满珠，张蔚*（华中农业大学园艺林学学院，园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉430070）摘要：利用矮牵牛（Petuniahybrida）基因表达谱芯片筛选出应答低温胁迫的相关基因，从中发现1个B-box型锌指蛋白基因PhBBX8。通过RT-PCR克隆得到该基因的编码区序列（CDS），为1242bp，预测其编码氨基酸413aa，N端含有2个B-box盒，C端含有1个CCT结构域。系统进化树分析发现，PhBBX8与拟南芥AtBBX8等聚类为一支。利用半定量RT-PCR检测其在根、茎、叶和花中的表达特性，结果表明该基因在花中表达量较高，其次为根，而在茎和叶中表达较弱；利用实时定量PCR检测了在低温、干旱、ABA、MeJA、高盐和高渗胁迫处理下矮牵牛叶片中PhBBX8的诱导表达情况，结果表明，PhBBX8表现出不同程度的上调，其中除干旱胁迫外，其他胁迫下上调倍数都较高，初步推测该基因与矮牵牛应答低温等非生物逆境相关。关键词：矮牵牛；B-box；锌指蛋白；非生物逆境；表达分析：S681.9文献标志码：A：0513-353X（2014）12-2437-09CloningandExpressionAnalysisofaB-box-typeZinc-fingerProteinGenePhBBX8inPetuniahybridaNINGLu-yun，LIBei，LIPei，BAOMan-zhu，andZHANGWei*（KeyLaboratoryofHorticulturalPlantBiology（MinistryofEducation），CollegeofHorticultureForestrySciences，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China）Abstract：Geneexpressionmicroarrayofpetuniawasappliedtoselectcoldresponsivegene，fromwhichaB-box-typezinc-fingerproteingenePhBBX8wasdiscovered.ThefulllengthofthecodingregionofPhBBX8amplifiedbyRT-PCRwas1242bp，andtheproductofPhBBX8genewaspredictedtoconsistof413aminoacidresidualscontainingtwoB-boxdomainsattheN-terminalandoneCCTdomainattheC-terminal.ThephylogenetictreeanalysesshowedthatPhBBX8---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---wasclusteredinthesamebranchwithAtBBX8inArabidopsis.Bysemi-quantitativeRT-PCR，PhBBX8wasfoundtoexpressdifferentiallyinallthetissuesdetected，includingroot，stem，leafandflower.Stressinducedexpressionanalysisbyreal-timequantitativePCRshowedthattheexpressionofPhBBX8couldbeinducednotonlybycold，butalsobydrought，ABA，MeJA，saltandhypertonicstressesindifferentdegrees，suggestingPhBBX8genewasassociatedwiththeresponsesofcoldandotherabioticstresses.*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：zhangw@mail.hzau.edu）---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---2438园艺学报41卷Keywords：Petuniahybrida；B-box；zinc-fingerprotein；abioticstress；expressionanalysis锌指蛋白最早是在1985年由Miller等（1985）在非洲爪蟾卵母细胞转录因子TFⅢA中发现，随后陆续在包括人类（Bondetal.，2004；Jonesetal.，2006）的哺乳动物、植物、果蝇（Liangetal.，2008）、酵母（Mazauricetal.，2010）和病毒（Morelletetal.，2006）中鉴定出大量的锌指蛋白。Berg（1993）根据锌指蛋白序列与功能的不同将其分为9大类：C2H2、C8、C6、C3HC4、C2HC、C2HC5、C4、C4HC3和CCCH（C和H分别代表半胱氨酸和组氨酸）。Iuchi（2001）对目前所发现的锌指蛋白结构进行分析，结果表明，大部分锌指蛋白都属于C2H2型。还有一些转录因子虽然不含有经典的锌指结构域，但含有类似的锌指结构域。Greb等（2007）发现PHD锌指结构域能够特异性识别并结合组蛋白H3K4的甲基化密码（修饰），发挥基因转录调控功能，参与植物多种生长发育以及非生物逆境胁迫响应等过程。B-box蛋白...