麦氏安瘗蜂体内侵染Wolbachia的W0噬菌体的检测及其orf7基因序列分析摘要：Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细菌，能对宿主的繁殖模式进行调控，包括诱导胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。W0噬菌体是一类侵染节肢动物体内Wolbachia的细菌病毒。为检测麦氏安瘗蜂Wolbachia是否被W0噬菌体侵染，本研究使用W0噬菌体的orf7基因引物，对信阳、六安及长沙3种群的W0噬菌体进行了PCR检测。结果显示，3种群的雌、雄虫体内的Wolbachia均有W0噬菌体的侵染，感染率为100%o获得的3种群麦氏安瘻蜂Wolbachia的W0噬菌体orf7基因序列均为371bp,序列完全一致。其序列与粉斑螟Ephestiacautella的wECauB3-1和wCauA5-l株系、反瓠茧蜂Asobaratabida的wAtabA3-3株系的一致性最高，在NJ和ML系统树中，均聚合在同一分支，属于W0噬菌体的第III大群。关键词：麦氏安瘻蜂；Wolbachia；W0噬菌体；orf7基因；系统发育关系中图分类号：Q968文献标识码：A文章编号：1007-7847(2014)03-0227-05沃尔巴克氏体Wolbachia是一类母系遗传的细胞质共生菌，属于原核生物界细菌门，变形菌纲的a亚纲，立克次氏体目，立克次氏体科，Wol-bachia族,Wolbachia属⑴。先前基于单一基因序列，将Wolbachia分为A、B、C、D、E、F、G和H8个群(group)[2],最近也用多位点分型对其加以了验证⑶。研究得较多的是A、B大群和C、D大群，前者主要感染节肢动物[4],后者主要感染丝状线虫⑸。估计超过17%的节肢动物、几乎全部的丝状线虫都感染了Wolbachia[6〜8]。Wolbachia能导致多种的宿主表现型，即在线虫类中表现为互利共生，而在节肢动物中则表现为对宿主生殖的调控。Wol-bachia对节肢动物宿主的生殖调控包括:诱导宿主胞质不亲和(cytoplasmicincompatibility,Cl)[9]、孤雌生殖(parthenogenesisinduction,PI)[10]>雌性化(feminizationofgeneticmales)[II]及雄性致死(malekilling,MK)[12]o此外，还发现Wolbachia对某些膜翅目昆虫的卵巢成熟有促进作用[13]o但也有一些Wolbachia种群并不导致宿主的生殖异常[14]o20世纪70年代末在Culexpipiens体内检测到W0类似元件的存在[15],Masui等首次在Teleo-gryllustaiwanemma感染的Wolbachia中发现了W0噬菌体[16]o经噬菌体衣壳蛋白orf7基因的PCR检测，发现超过89%的节肢动物Wolbachia感染了W0噬菌体[17.18]o由于现在广泛使用的。卄7基因的引物还不是足够的保守，不能扩增所有的W0噬菌体类型，所以W0噬菌体的实际侵染率可能更高。如利用orf7基因的PCR扩增,仅发现WolbachiawRi株系的单一W0噬菌体感染[18],但对其全基因测序则发现共含3种噬菌体片段[19]o另一方面，在丝状线虫的Wolbachia种群中尚未检测到W0噬菌体的感染[18]o二十面体结构的W0噬菌体粒子已经在一些感染Wolbachia的节肢动物中成功纯化，通过透射电镜观察，可以发现W0噬菌体头部的尺寸约为20〜40nm,偶尔可见具备类似于T2噬菌体的蛋白质尾部[20,21]o最新的研究表明，W0噬菌体染色体为环状，其复制类型类似于入噬菌体[22]oi前，将W0噬菌体分为W0-A和W0-B两种类型[23]o利用现有orf7基因引物，仅能扩增到WO-B,基于其基因序列，可将W0-B划分为3个大群(group)[17]o瘻蜂科为瘻蜂总科(Cynipoidea)中的植食性类群,一般于为害部位形成虫瘻，已知约1400种，可划分为两个亚科，即古瘻蜂亚科Hodiernocynip-lnae和瘻蜂亚科Cynipinae,瘻蜂亚科包含6个族，即栋瘗蜂族Cynipini>客瘗蜂族Synergini>豆瘻蜂族Eschatocerin>蔷薇瘻蜂族Diplolepidini、械瘻蜂族Pediaspidili及草瘻蜂族Aylacinj［24,25］。已证实草瘗蜂族、蔷薇瘗蜂族、栋瘻蜂族和客瘻蜂族的部分种类有Wolbachia的感染［26〜29］。麦氏安瘻蜂AndricusmaireiKieffer属于瘻蜂亚科瘻蜂族(Cynip-ini),寄主为短柄袍栋QMercusglanduliferavar.bre-vipetiolataNakai,于春季在寄主白勺枝条上形成虫瘗，杨筱慧等证实其具Wolbachia感染，感染的Wolbachia属于A大群［30］。本研究于河南信阳、安徽六安及湖南长沙采集了麦氏安瘻蜂虫瘻，并获得羽化成虫。利用W0噬菌体的orf7基因特异性引物,通过PCR法扩增了其基因片段，测定了目的基因片段的DNA序列，证实了麦氏安瘗蜂体内共生的Wolbachia具W0噬菌体侵染。通过与己知...