盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤的实验研究国伟1王盟1通讯作者王盟通讯作者孟建中2伊忻1(1济宁市第一人民医院山东济宁272111;2济南军区总医院山东济南250031)【摘要】目的探讨盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemiareperfusioninjury,IRI)的作用机制。建立大鼠肾脏缺血再灌注(IRI)动物模型，随机将75只Wistar大鼠分成空白对照组(n=25),IR模型组(n=25),治疗组(n=25),并观察5个时间点(6、12、24、48、72h)各组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血管内皮生长因子(VEGF)的水平变化；并釆用免疫组化法检测RhoA蛋白表达。结果表明：(1)IR组Scr、BUN水平于再灌注后6h开始升髙，48h达高峰,治疗6h、12h、24h、48h、72h组均低于模型组(P<0.01)。(2)肾组织RhoA、VGEF表达于再灌注后6h开始升高，12h达到峰值，24h后下降，但均较对照组明显增加(P<0.01)。(3)盐酸法舒地尔治疗组(F组)Scr、BUN、RhoA、VGEF表达均明显低于IR模型组(P<0.01)。盐酸法舒地尔可能通过阻断Rho/Rho激酶信号通路，减少VEGF的牛.成，抑制内皮细胞通透性，减轻肾脏缺血再灌注损伤。【关键词】Rho激酶缺血再灌注血管内皮生讼因子盐酸法舒地尔【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)39-0050-031引言缺血再灌注损伤(ischemiareperfusioninjury,IRI)是引起自身和移植贤脏发生急性肾损伤(acutekidneyinjury,AKI)的主要原因之一，导致肾脏IRI的原因有心血管疾病、脓毒症、创伤、休克、脱水及外科手术等。研究发现肾缺血再灌注损伤时主要累及近端肾小管上皮细胞，引起结构和功能的破坏。近年来研宄发现血管内皮生长因子(VEGF)特异性作用于内皮细胞(endothelialcells,ECs),在诱导血管内皮细胞渗透性增加机制中起重要的作用。Rho/Rho激酶是具有信号传导和分子幵关作用的信号多肽，参与血管平滑肌收缩、细胞分化及细胞凋亡等多种细胞功能［1】。0前有学者认为Rho/Rho激酶参与了内皮细胞的收缩［2］,增加了内皮细胞的通透性，是调控EC通透性改变的信号分子［3】。研究表明Rho/Rho激酶信号通路参与VEGF诱导的体外内皮细胞运动和血管生成［4］。盐酸法舒地尔作为一种Rho激酶特异性抑制剂，通过阻断Rho/Rho激酶信号通路具有扩血管、抗炎等广泛的作用。本实验通过观察盐酸法舒地尔对肾脏缺血再灌注损伤中血清SenBUN及肾组织RhoA、VGEF的影响，探讨其防治肾脏缺血再灌注损伤可能的机制。2材料和方法2.1试剂与材料雄性Wista大鼠（由山东大学医学院实验动物中心提供）。盐酸法舒地尔注射液由天津红日药业股份有限公司提供（2ml/支，30mg）。兔抗大鼠VEGF多克隆抗体试剂盒由美国NEOMARKER公司提供，兔抗人鼠RhoA多克隆抗体由美国SantaCruz公司提供。2.2动物分组与模型建立2.2.1健康雄性Wista大鼠75只，体重270士10g，经适应性饲养1周后，随机分成3组：空白对照组，IR模型组，法舒地尔治疗组，每组各25只。3组大鼠分别再随机分成再灌注6、12、24、48、72小吋5个不同吋段亚组，每组各5只。2.2.2IRI模型建立：10%水合氯醛（3〜5ml/kg）腹腔注射麻醉成功后，沿腹正中纵轴线做切UI，暴露双侧肾脏，用无损伤微型动脉夹迅速阻断双侧肾动脉，肾脏由红色变紫黑色表示夹闭成功，共持续夹闭60min松开动脉夹。Con组：暴露双侧肾脏后，覆盖浸奋生理盐水的纱布，60min后去除纱布后逐层关腹，缝合切U。IR组:建立肾脏IRI模型。F治疗组：同法建立IRI模型，在缺血再灌注前5分钟腹腔注射盐酸法舒地尔（30mg/kg＞。2.3观察指标2.3.1血尿素氮、血肌酐：各组在相应吋间点开服取静脉血5ml，分别检测血清Scr、BUN的含量。2.3.2免疫组化检测VEGF、RhoA免疫组化方法采用辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素染色法(SP法)检测VEGF、RhoA。2.4统计学分析方法所有数据应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。计数数据以均数士标准(x-&plusmn;s),各组间样本均数比较均采用单因素方差分析(one-wayANOVA)。P<0.05表示差别有统计学意义，P<O.Ol表示差别冇显著统计学意义。3结果3.1各组实验大鼠Scr、BUN变化Con组各时间点Scr、BUN维持在较低水平，各吋相之间无明显差异(P>0.05)oIR组Scr、BUN水平于再灌注后6h开始升高，于再灌注后48h达高峰，72h后开...