IL-9对弥漫大B细胞淋巴瘤的调控及其机制的研究分析南朝阳(辽宁省大连市金州新区第一人民医院M6100)【摘要】目的探讨IL-9对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖与凋亡及其机制。方法应用Westernblot检测了淋巴瘤细胞株LY1及LY8中IL-9R的表达，用IL-9处理淋巴瘤细胞株LY1及LY8,采用Brdu掺入法检测细胞增殖，采用AnnexinV-FITC/P流式细胞术检测细胞凋亡；利用实时定量PCR检测JAK-STAT信号通路相关基因(BCL2L1,BAX,p21CIPI,PIMI,MYC以及MCL)的变化情况。结果瘤细胞株LY1及LY8中IL-9R在蛋白水平有表达，IL・9能促进LY1及LY8细胞的增殖并抑制其凋亡;p21CIPI在LY1及LY8细胞的表达均上调，BCL2L1,BAX,PIMI,MYC以及MCL基因的表达无明显的变化。结论IL-9能通过上调弥漫大B细胞淋巴瘤细胞中P21CIP1蛋白基因的表达促进瘤细胞的增殖并抑制其凋亡。【关键词】弥漫大B细胞淋巴瘤；IL-9；细胞增殖；细胞凋亡【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-7165(2015)12-0110-01弥漫性大B淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphomaQLBCL)是临床最常见的非霍奇金淋巴瘤，其发病率约为7-8例/10万人次，R在近10年间呈逐年增长趋势。国际上公认的治疗该病的治疗方案为为利妥昔单抗的(R-CHOP)方案，但在用药过程中容易出现耐药或疾病复发以及出现心律失常、肝功能衰渴、支气管痉挛、低血药呼吸困难等严重并发症，影响了治疗效果［1］。木研究以DLBCL细胞株LY1及LY8为研究对象，检测IL・9对细胞增殖和凋亡影响，IL・9对JAK・STAT通路下游细胞调亡基因的变化，进而初步探讨IL-9影响DLBCL细胞牛物学行为的机制。1材料与方法1.1材料DLBCL细胞株LY1及LY8由木实验室保存,RPMI-1640培养基、胎牛血清(fFBS)、IMDM完全培养基、碘化丙唳、Brdu细胞增殖检测试剂盒、细胞凋亡双染检测试剂盒与DMSO均购自美国Sigma公司。兔抗人IL-9R多克隆抗体购自美国abeam公司，人重组IL-9为美国Peprotech公司产品。BCL2L1,BAX,p21CIPI,PIMI,MYC以及MCL单克隆抗体试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。1.2方法1.2.1细胞培养LYI、LY8细胞株采用含10%胎牛血清(FBS)、青霉素(IOOU/ml)及链霉素(IOOtng/ml)的IMDM完全培养基于37°C、5%CO2、饱和条件下培养。所有实验均选取对数生长期的细胞。1.2.2Western-blot检测蛋白表达取对数生长期的LYI、LY8细胞，加入蛋白裂解液充分裂解细胞提取蛋70V恒压电泳约30min,100V恒压电泳约90~120min,5%脱脂奶粉，水平摇床室温封闭1.5h,特异性I抗4°C摇床过夜，特异性II抗摇床室温lh曝光。1.2.3Brdu掺入法检测细胞增殖取对数生长期的LYI、LY8细胞以l×105/ml的密度接种于96孔板，每孔120?1的培养基。加入IL・9,使其终浓度分别为0、20、40、60和80ng/mL,37°C孵育72h,加入10?1的Brdu稀释液,37°C孵育2h,96孔板离心(转速：300g)10min,弃去上清液，每孔加入100?1的抗体工作液，室温放置90min,弃去上清，加入100?1基底液，摇床3min,于SpectraMaxM2酶标仪490nm测量吸光值。1.2.4AnnexinV-FITC/PI双标记法流式细胞术测定细胞凋亡计数细胞，2×105cells/孔，收集IL・9浓度干预72h后的LY1及LY8细胞，l×PBS洗涤后，加入5?lAnnexinV-FITC混匀后，加入5?lPI溶液，室温避光孵育10min,上机检测。1.2.5实吋定量PCR检测检测JAK-STAT信号通路相关基因收集浓度80ng/ml的IL・9干预72h后的LY1及LY8细胞，5×105cells/样本，提取RNA,逆转录后以反应物进行实时定量PCR扩增,应用2-AACt法相对定量分析目的基因。1.3统计学方法应用SPSS16.0统计软件进行数据统计分析，所有数据采用(±s)表示,采用t检验分析，结果以P<0.05为有统计学意义。2结果2.1细胞株中IL-9R的表达情况DLBCL细胞株LY1及LY8中IL-9R在蛋白水平有表达。2.2IL-9对DLBCL细胞增殖及调亡的影响IL-9能够剂量性增加LY1及LY8的增殖，浓度为80ng/mL时，LY1及LY8细胞的增殖能增加25%oIL-9能够剂量性降低LY1及LY8的凋亡，浓度为80ng/mL时,LY1及LY8细胞凋亡约为基础水平的50%o2.3IL-9对DLBCL细胞内的调亡基因的影响p21CIPI在LY1及LY8细胞的表达均上调，但LY8细胞基因的mRNA水平上调较LY1细胞显著，BCL2L1,BAX,PIMI,MYC以及MCL基因的表达无明显的变化。3讨论DLBCL发...
