核苷酸类似物相关乙型肝炎病毒逆转录酶耐药突变分析及rtA181耐药突变的个体化再治疗周继明（解放军第153屮心医院450000）【摘要】A的：对核苷酸类似物（NUCs）治疗慢性乙型肝炎（CHB）病人时出现的逆转录酶（RT）耐药突变现象进行分析，并针对rtA181耐药突变现象进行血清检测，观察其个体化再治疗的效果。方法：以焦磷酸测序法（PCR）对489名CHB病人的HBVrt区屮的十个耐药突变位点予以定理检测并进行突变分析，并对LAM+ADV组屮的43名rtA181突变病人分组进行个体化再治疗，A组予以EDV治疗，B组予以LdT治疗，对比其临床疗效。结果：（1）DNA类型为C型者占82.4%,B型者占17.6%,其屮C型耐药变异率为56.6%，B型耐药变异率为43.0%；（2）265份显示与LAM、LdT、ETV以及ADV有显著相关性；（3）HA181突变病人的HBVDNA水平为明显低于疗前水平,P<0.05；（4）对rtA181突变病人行个体化再治疗时，HBVDNA<6lgcopies/mL时的疗效更好，且ETV治疗的效果比LdT治疗好（P<0.05）。结论：HBV耐药突变以M204与A181为主，对rtA181突变病人，力口/换用ETV的疗效较好。【关键词】核苷（酸）类似物乙型肝炎病毒耐药突变rtA181【屮图分类号】R45【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）12-0111-02当前治疗慢性乙型肝炎（CHB）的主要方法是抗病毒治疗［1］。其屮又以核苷酸（NUCs）治疗最具认可度。然而，大部分病人无法在短时间内实现持久应答，丑NUCs治疗时间越长，相关HBV逆转录酶（RT）的耐药安全性越低。耐药突变不但会使治疗变得更复杂，还可能促进病情进展，引发严重肝脏疾病［2］。本文主要分析NUCs治疗期间出现的HBVrt耐药突变现象，探讨rtA181突变的个体化再治疗方案。1资料与方法1.1一般资料2009年3月一2013年10月期间，本院共489名CHB病人在接受NUCs治疗期间出现耐药突变。病程>半年，疗前平均HBVDNA为(6.20&plusmn;1.41)1lgcopies/mL。其中男性病人402名，女性病人87名，年龄范围13—71岁，平均约42.1岁。1.2方法(1)DNA扩增以及测序：提取CHB病人的血清样本，以PCR法对RT区的基因片段进行扩增。P1和P2区(ntl8-40和ntl320-1301)扩增第一轮，P3和P4区(nt56-75和ntl272-1253)扩増第二轮。(2)耐药分析:通过焦磷酸测序法，定量检测489名CHB病人的HBVrt基因区十个NUCs相关耐药突变处，十个位点分别为rtll69T、rtV173L、rtL180M、rtA181V/T、rtL184G、rtl94T、rts202l、rtM204V/l、rtN236T、rtM250V。并分析各个耐药突变位点分别和拉米夫定(LAM)、替比夫定(LdT)、恩替卡韦(ETV)以及阿德福韦酯(ADV)的相关性。M吋，对rtA181发生突变的病人做血清HBVDNA检测，血清HBsAg定量检测以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平检测。(3)rtA181突变病人个体化再治疗：将rtA181突变病人分为2组，A组加/换用ETV,B组加用LdT,对比其治疗效果。1.3统计方法所有数据由SPSS16.0处理，统计学差异以P<0.05标记。2结果2.1HBVDNA类型分布DNA类型为C型者di82.4%,B型者占17.6%,其中C型耐药变异率为56.6%,B型耐药变异率为43.0%,P<0.05o见表1。表1HBVDNA类型分布[n(%)]总例数B型C型B型耐药变异C型耐药变异48986(17.6)403(82.4)37(43.0)228(56.6)P值<0.05<0.052.2HBV耐药点分析489份血清样本均测序成功，其中有265份显示与LAM、LdT、ETV以及ADV冇显著相关性。按照病人的用药及耐药突变情况进行分组得:LAM组共138人，其中主要为M204I/V合并补偿位点变异，可见M204I单独变异存在，无M204V单独变异；ADV组共35人，主要变异位点为N236T+A181T/V；LAM+ADV组共70人，大部分变异为A181T/V，偶见M204I/V;变异ETV组与LdT组各4人，ETV组变异全部表现为M204I/V变异；此外，使用过多种药物的病人共14人，其中有2人发生多为点耐药突变。2.3rtA181耐药突变分析rtA181耐药突变吋，其HBVDNA水平为(5.58&plusmn;1.00)llgcopies/mL,明显低于疗前的平均值(6.20&plusmn;1.41)lgcopies/mL,P<0.05，而与多位突变病人的(5.63&plusmn;1.02)lgcopies/mL无明显差异(P>0.05)。具体rtA181突变血清样本的各项指标水平见表2。表2突变病人的各项指标突变位点例数HBVDNA(lgcopies/mL)HBsAg(lglU/mL)ALT(U/L)rtA181315.59&plusmn;1.473.80&plusmn;0.4164rtA181195.56&plusmn...