糖尿病绝经前女性血管内皮功能变化的研究杨震1姚顺1曾海涛2苏晨1陶军1(通讯作者)(1中山大学附属第一医院高血压血管病科广东广州510080)(2中山大学附属第六医院生殖中心广东广州510080)【摘要】背景：目前对糖尿病的绝经前期女性内皮功能的改变尚不明确。目的：探讨糖尿病对绝经前期女性内皮功能的影响。方法：选择40例年龄43.9&plusmn;6.2岁的人群作为研究对象，分为两组：血压正常的绝经前女性(22例)、患糖尿病血压正常的绝经前女性(21例)，使用高分辨率超声技术评估血管舒张功能;利用流式细胞仪测定两组CD34和KDR双标阳性循环EPCs水平，使用ac-LDL及lectin荧光标记方法评估体外培养EPCs数量；检测EPC迁移能力和增殖能力；并探讨血管舒张功能与EPC功能的关系。结果及结论：使用超声技术检测血管扩张功能显示，合并糖尿病的血压正常绝经前女性FMD明显低于非糖尿病的血压正常绝经前女性(P<0.05)。两组受试者GMD均没有明显差异(P>0.05)。流式细胞仪显示循环EPCs水平及荧光标记证实培养的EPCs数量在正常血压的绝经前女性中明显差异高于合并糖尿病的血压正常绝经前女性(P>0.05)。同样，循环EPCs的迁移和增殖功能在血压正常的绝经前女性明显高于合并有糖尿病的绝经前女性(P<0.05)o通过流式细胞仪分析及细胞培养试验，可以发现FMD分别与循环EPCs水平(r=0.41,P<0.05)及培养的EPCs数量(r=0.74,P<0.05)呈明显线性相关。同样，EPC的迁移能力和增殖能力也分别与血浆FMD呈线性相关(r=0.64,P<0.05；r=0.56,P<0.05)。这些结果说明合并糖尿病的绝经前期女性的内皮功能下降，钮括内皮依赖性血管舒张功能下降以及体内EPC数量减少和功能下降，提示维持内源性血管损伤修复能力及改善内皮功能可能是合并糖尿病的绝经前女性血管保护的重要机制之一。【关键词】干细胞；内皮祖细胞；绝经前期；糖尿病【中图分类号】R587.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2016)05-0104-02糖尿病是一个以代谢紊乱为特征，增加患病率和死亡率的代谢性疾病。相比较非糖尿病患者，糖尿病患者发生心脑血管事件并发症的风险很高，这与内皮损伤和内皮功能障碍有关［1】。大量研宄发现来源于骨髓、外周血和脐血中的内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)是参与再内皮化，修复内皮损伤以及改善内皮功能的一类干细胞亚群［7-10］。在心血管危险因素影响下，如糖尿病，肥胖或吸烟，EPCs的数量和活性则会下降，这可能导致内皮损伤的发生与发展。然而，在绝经前期女性中，心血管疾病风险的发生几率要较绝经期后女性要低。绝经前女性维持高水平的EPCs的数量和功能可能与血浆雌激素水平奋关［2］，而绝经期后女性心血管疾病风险增加可能与内皮损伤及功能受损部分相关［3】。我们前期研究表明，循环EPCs的数量和活性在绝经前期女性中维持较高水平，这也说明了保持正常的内皮修复能力可能有利于绝经前期女性的血管保护作用［12］。然而，合并糖尿病的绝经前期女性中EPCs保护血管的有利效应是否存在仍不清楚，所以本研究探讨糖尿病对绝经前女性内皮功能的影响，旨在阐明合并糖尿病的绝经前女性血管保护的可能机制，并为合并糖尿病相关血管损伤修复寻找新的干预靶点。i.材料与方法1.1材料与试剂CD34流式细胞焚光抗体购于BD公司，EGM-2培养基购于Clonetics公司，纤维连接蛋白购于HematologicTechnologies公司，ac-LDL购于MolecularProbes公司，Lectin购于Sigma公司，二苯基网氮卩坐摸盐(MTT)购自Fluka公司。1.2对象我们招募了40例年龄44.5&plusmn;5.2岁志愿者，分为两组:绝经前健康女性(22例)、和合并糖尿病的正常血压绝经前女性(21例)。依据美国糖尿病协会专家委员会报告指南，对新近诊断且未进行药物治疗的绝经前期合并2型糖尿病的女性进行诊断［20］。并II排除了心血管疾病、恶性肿瘤、感染或炎症性疾病，以避免对循环EPCs数量和功能产生影响；孕妇、哺乳期妇女、子宫切除及吸烟者也不纳入本研宄。所奋志愿者通过询问病史、详细的体格检查和实验室检査。1.3流式细胞仪测定循环EPCs水平取200?L外周血与FLK-1流式细胞荧光抗体一抗孵育20min,再加入FLK-1二抗孵育20min,之后加入CD34流式细胞荧光抗体孵育20min。最后将红细胞溶解，...