姜黄素诱导前列腺癌细胞DU145凋亡的研究【摘要】目的:研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的体外生长活性、诱导细胞凋亡作用。方法DU145细胞经不同浓度(10,20,40,80mol/ml)姜黄素作用24h、48h、72h,以四氮甲卩坐蓝(MTT)比色法观察细胞增殖效果，流式细胞术测定细胞凋亡,以仅加入培养液没有药物处理作为空白对照组。结果姜黄素作用于DU145细胞24h、48h、72h,MTT结果表明细胞生长受到抑制，呈现时间剂量依赖性。流式细胞术结果确定细胞发生凋亡，20,40,80mol/ml浓度组的凋亡细胞比例均显著高于对照组，差异有显著性意义(P【关键词】姜黄素；肿瘤；凋亡【中图分类号】R737.25【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)10-0099-02前列腺癌(ProstateCancer,PCa)是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一⑴。在西方国家，前列腺癌发病率居男性恶性肿瘤第2位。在我国，前列腺癌也是一种常见的男性恶性肿瘤，随着人口寿命的延长和生活方式的变化，加上诊断技术的发展使得确诊率不断提高，前列腺癌的发病率也呈逐年上升的趋势，近年已列泌尿系肿瘤的第3位，且发病年龄日趋年轻化，严重影响了我国男性健康。中药复方或单味药的有效成分具有抑制肿瘤细胞生长的作用己有多方面的报告[2-3],本实验通过观测姜黄素不同浓度、不同作用时间对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145进行体外干预，观察抑制细胞增殖效果和诱导细胞凋亡情况，希望能通过本实验研究,为姜黄素治疗前列腺癌提供理论依据。1材料与方法1.1实验材料雄激素非依赖性前列腺癌细胞系DU145细胞购自中科院上海细胞库(ATCC),姜黄素购自广州医药工业研究所。1.2主要试剂RPMI1640培养基高糖型购自美国Gibco公司，优级胎牛血清(FBS)购自TBD公司oTRYPSIN0.25%EDTA胰酶、碘化丙噪(PI)、RNaseA酶、青霉素、链霉素、谷氨酰胺(L-glutamine)>MTT、二甲基亚飒(DMSO)购自美国Sigma公司o1.3设备多功能酶联免疫分析仪，HARRIS二氧化碳培养箱、HEPAclasslOO培养箱；NIKON倒置显微镜、BECKMAN流式细胞分析仪。1.4MTT试验法分析其体外抗肿瘤活性(1)将培养细胞稀释至2.5X103-50X103个/ml,用加样器在平底96孔板的各孔中加入200uI细胞悬液，每孔加0.5X103-10X103个细胞，将200卩1无菌PBS加至上下两行及左右两列的孔中。(2)5%CO2,37°C孵育，等细胞进入指数生长期时可加入浓度梯度的药物，用培养基将中药提取物按按倍数稀释，共制备4个浓度。(3)空白对照组培养液中只加入等量的培养液,没有药物，其余各孔细胞中加入10,20,40,80mol/ml姜黄素中药提取物。每个药物浓度设6个复孔，并向每组6孔中各加入200PI药物溶液。(4)24h、48h、72h后所有孔中各加入10UIMTT,用铝箔包裹培养板，于37°C避光温育4h。(5)终止培养，小心吸去孔内的培养基和MTT,所有孔中各加入200HIDMSO,置摇床上低速振荡lOmin,使结晶物充分溶解。立即在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值(A)。读板仪用第2列为各孔调零。分析以药物浓度为横坐标(X轴)，吸光值为纵坐标(Y轴)绘制曲线图。每组实验重复3次。计算抑制率（IR）:抑制率（％）二⑴实验组A均数/对照组A均数）X100%1.5流式细胞仪检测DU145细胞凋亡率（1）将各组中药处理24h,48h,72h后的DU145细胞用少量胰蛋白酶消化，取106细胞，1000r/min离心5min收集细胞。（2）3mlPBS洗一次，离心弃上清，加入2ml冰预冷的70%无水乙醇，于4°C固定保存过夜。（3）将固定的细胞离心去固定液，3mlPBS重悬5min,1000r/min离心5min,弃上清。再加入lOULRNaseA,37°C水浴消化30min。（4）加入0.2mlPI荧光染料染色,20min室温避光，用流式细胞仪测定PI荧光强度，计算凋亡细胞百分1.6统计学处理采用SPSS13.0软件对数据进行方差分析。所有数据以均数土标准差（土S）表示，配对资料采用t检验进行统计分析，P