HPLC-MS法检测人泪液中葡萄糖含量方法学研宄袁艳娟1何学军2邵卿1刘晶1乔红群1(1南京工业大学/江苏省药物研究所/江苏省药物安全性评价中心江苏南京210009)(2南京工业大学江苏南京210009)【摘要】建立了人泪液中葡萄糖含量的HPLC-MS测定方法。色谱柱为WatersXbridgeAmind柱(2.1×100mm,3.5µm),流动相为0.1%甲酸-乙腈(15：85),柱温：20°C；流速：0.2ml/min,进样量20μl。葡萄糖浓度在lμg/ml〜40μg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系，定量限为lμg/mlo釆用液质联用法检测人泪液中葡萄糖含量，该法专属性强，方法简单，结果可靠。【关键词】泪液葡萄糖HPLC-MS【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)08-0118-02DeterminationoftheconcentrationofTearGlucosebyHPLC-MSYUANYan-juanl,HEXue-jun2,SHAOQinl,UUJinl,QIAOHong-qun*l(1.NanjingUniversityOfTechnologyJiangsuProvincialInstituteofMaterialMedica,JiangSuCenterForSafetyEvaluationOfDrugsNanjing210009China2.NanjingUniversityOfTechnologyNanjing210009China,)【Abstract】DeterminationoftheconcentrationoftearglucosewasestablishedbyHPLC-MS.WatersXbridgeAmind(2.1×100mm,3.5µm)columnwasused,0.1%Formicacid-acetonitrileasmobilephase,columntemperature:20°C;flowrate:0.2ml/min;injectionvolume20μl.Peakareaofglucosewasinagoodlinearcorrelationwithinjectionquanlitywithintherangeoflμg/ml〜40μg/mloThelimitofquantificationwaslμg/ml.Thismethodusedforthedeterminationoftheconcentrationoftearglucosewasspecificity,simpleandreliable.【Keywords】TearGlucoseHPLC-MS糖尿病是一组内分泌代谢疾病，以高血糖为其主要标志。可伴发各种慢性并发症。糖尿病患者在持续高血糖或血糖不稳定状态下可导致其唾液、泪液等体液中糖含量发生改变。0前临床上通常把检测血糖做为诊断糖屎病的方法之一,但血糖易受多种因素影响，且糖尿病患者的血糖水平极不稳定。而泪糖测定在统一采集方法的前提下，影响因素较少，并且有敏感性高、无损伤、标本来源方便、操作简单及泪糖含量较恒定等优点［1】。正常人泪液中含有一定量的葡萄糖，为0.14士0.07mmol/L,糖尿病人泪糖含量较正常人高为0.32士0.18mmol/L即在25μg/ml以上［2】。目前检测泪糖的方法有多种，March等［3］首先报道研制出可用于临床的用于检测泪糖的角膜接触镜，通过角膜接触镜上荧光的强弱来了解泪糖的情况，当泪糖升高吋，角膜接触镜上的荧光信号会增强，但是它并不能反应泪糖的具体数值。Badugu等［4］研制出•一种无色的角膜接触镜，当含冇荧光闭的硼酸与泪液中的葡萄糖发生反应吋，可出现荧光反应，通过分光光度计测量吸收值可以了解泪液中葡萄糖含量。但是这些方法都比较复杂，本文探讨了采用HPLC-MS法检测人泪液中葡萄糖含量的方法。1实验部分1.1仪器与试剂WatersQuattroMicro三重四级杆质谱仪（电喷雾离子化接口），Waters2695液相色谱仪（沃特斯中国有限公司），含在线真空脱气机、四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱。工作站：MaSSlynx4.0数据分析系统。D-无水葡萄糖对照品（110833-200503,中国药品生物制品检定所）；内标6,6-脱氧D-葡萄糖（282650,ISOTEC）,乙腈：TediaCompany,色谱纯；甲酸：国药集团化学试剂有限公司，分析纯1.2分析方法1.2.1HPLC条件色谱柱：WatersXbridgeAmind柱(2.1×100mm，3.5µm)；流动相：0.1%甲酸-乙腈(15:85);柱温：20°C；流速：0.2ml/min；进样量：20µl。1.2.2质谱条件检测方式：选择离子检测(SIR);电喷雾离子源(ESI);扫描方式：正离子；喷雾电压3.0kV;锥孔电压30V;源温度：120°C;溶剂区温度:350°C；雾化气流速400L/h;气帘气流速50L/h。定量离子:D-葡萄糖［M+NaRm/z203.1；6,6-脱氧D-葡萄糖［M+Na］+m/z205.1。2结果与讨论2.1D-葡萄糖，内标电喷雾离子化质谱扫描图在电喷雾离子化正离子检测条件下，D-葡萄糖形成的主要离子为D-葡萄糖［M+Na］+峰m/z203.1，见图1;6,6-脱氧D-葡萄糖形成的主要离子为6，6-脱氧D-葡萄糖［M+Na］+...