黄瓜硝酸还原酶基因(CsNR)序列分析及正反义表达载体的构建摘要：为进一步研究CsNR的作用机制，从黄瓜幼叶中克隆获得硝酸还原酶基因编码区序列(CDS)全长和片段(CsNR；EC1.6.6.1)，并运用生物学软件对该基因进行序列分析。其中CDS全长2748bp，编码915个氨基酸；CDS片段360bp。CDS全长和pROKII经Kpnl单酶切和连接，构建了CsNR正义表达载体;CDS片段和pROKII经Kpnl和Sacl双酶切，构建了CsNR反义表达载体。通过与其他高等植物NR蛋白进行同源性比对分析，结果发现，CsNR基因的氨基酸序列与甜瓜、烟草、拟南芥、油菜NR基因编码的氨基酸序列高度同源，其中与甜瓜NR蛋白之间同源性最高，为98.25%。本文采集自网络，本站发布的论文均是优质论文，供学习和研究使用，文中立场与本网站无关，版权和著作权归原作者所有，如有不愿意被转载的情况，请通知我们删除己转载的信息，如果需要分享，请保留本段说明。关键词：黄瓜；硝酸还原酶；生物信息学；正义表达载体；反义表达载体中图分类号：S642.2文献标识码：AD0I编码10.3969/j.issn.1006-6500.2017.07.001---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---SequenceAnalysisandConstructionofSenseandAntisenseExpressingVectorofCucumberNitrateReductase(CsNR)PANLinglingl,WANGXiufcngl，2，LIQiangl,YANGFcngjuanl,2，WEIMini,3,SHIQinghual,2(1.CollegeofHorticultureScienceandEngineering，ShandongAgriculturalUniversity,Tai’an，Shandong271018,China；2.StateKeyLaboratoryofCropScience,Tai/an，Shandong271018，China；3.ScientificObservingandExperimentalStationofEnvironmentControlledAgriculturalEngineeringinHuang-Huai-HaiRegion,MinistryofAgriculture，Tai’an，Shandong271018，China)Abstract:TofurtherstudythemechanismofCsNR，afragmentandfulllengthCDSofcucumbernitratereductase(CsNR；EC1.6.6.1)wasisolatedfromcucumber(CucumissativusL)youngleaves,respectively.Meanwhile，thegenesequencewasanalyzedbythebiologysoftware.Thefragmentandfull-lengthCDSwas2952and360bp,respectively.Thefull-lengthCDSandpROKIIweredigestedtoconstructsenseexpressingvector.ThefragmentCDSandpROKIIweredigestedtoconstructsenseexpressingvector.ThehomologyalignmentanalysisindicatedthattheproteinencodedbyCsNRwasinhighsimilaritywithNR—encodingproteininCucumismelo，Nicotiana---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---tabacum,ArabidopsisthalianaandBrassicacampestris.ThehomologywithaminoacidsequencesofCsNRcomparedwithCucumismclowasthehighestby98.25%.Keywords:CucumissatinusL.；nitratereduatase；bioinformatics；senseexpressingvector；antisenseexpressionvector植物硝酸?原酶(Nitratereductase,NR)是葱同化代谢的关键酶和限速酶，它以还原型辅酶(NAD(P)H)为电子供体催化硝酸盐的还原，生成亚硝酸盐。硝酸盐通过谷氨酸合成循环转变为铵，分别由胞质中的NR以及叶片叶绿体中的亚硝酸还原酶催化［1］。NR催化硝酸盐还原成亚硝酸盐是植物整个硝酸盐同化过程中的限速和关键作用步骤［2-4］，故NR被认为是硝酸盐同化过程中的限速酶和诱导酶［5-8］，那么植物中的硝酸还原酶活性和N03-含量之间就应该存在着密切联系［9］。对高等植物而言，研究发现硝酸盐是调节硝酸还原酶活性［5］以及NR表达［6］的主要因子。现己从大麦［10］、笋瓜［11］、烟草［12-13］、拟南芥［14-15］、番茄［16］、玉米［17］、萝卜［18］、生菜［19］和大白菜［20］等多种植物种类中克隆出了多种NR基因。目前，人们在植物的盐胁迫信号转导机制方面研究已取得了大量成就［21］，但均以NaCl作为盐胁迫处理手段。黄瓜作为主耍的设施蔬菜作物之一，在栽培中人们为了获高产，盲网施用大量氮肥；加之设施环境地温高、蒸发量大、无雨水淋洗以及连作等不合理的栽培方式，导致土壤发生次生盐渍化［22］。温室土壤次生盐渍化的盐分组成中，其阴离子主要是N03-，...