木枣果实生长过程中细胞壁酶活性变化的研究陈国梁任彤祖欢欢陈春张睿徐露王旭东陈宗礼摘要：以不同生长期木枣（ZiziphusjujubeMill.）果实为材料，测定果实纤维素酶（Cx-cellulase）、β-半乳糖苷酶（β-Gal）、果胶甲酯酶（PME）和多聚半乳糖醛酸酶（PG）等4种细胞壁酶的活性，探究其与木枣果实生长发育的相关性。结果表明，在整个生长过程中，Cx-cellulas酶活性相对平稳上升，β-Gal酶活性从全红期到完熟期迅速达到最大值，PME活性从半红期到全红期迅速下降;PG酶活性在完熟期明显升高;推测Cx-cellulase与木枣果实膨大相关，是木枣软化的重要物质之一;PME在启动木枣果实的转色中起作用;β-Gal和PG则在木枣果实成熟期起关键作用。关键词：木枣（ZiziphusjujubeMill.）;果实;生长过程;细胞壁酶;酶活性：S665.1：A：0439-8114（2019）16-0096-03DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.16.021开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Abstract：Usingthefruitofdifferentgrowingperiodofjujube（ZiziphusjujubeMill.）asmaterials，theactivityofcellwallenzymesofcellulase（Cx-cellulase），β-galactosidase（β-Gal），pectinmethylesterase（PME），andpolygalacturonase（PG）wereobservedanddiscussedtherelatedtothejujubefruitgrowthprocesses.Theresultsshowedthat：inthewholegrowth，Cx-cellulasewasrisedstablely，β-Galreachedmaximumfromfullredstagetofullripestage，PMEreducedfromhalfredstagetofullredstage，andPGwasrisedinfullripestage.ItwasspeculatedthatCx-cellulasewasrelatedtofruitenlargementofjujube，anditisoneoftheimportantsubstancesofsofteningofjujubefruit.PMEmaybeplayedaroleinstartingdiscolour，β-GalandPGplayakeyroleinthematureperiodofjujubefruit.Keywords：jujube（ZiziphusjujubeMill.）;fruit;processofgrowth;cellwallenzyme;enzymeactivity棗（ZiziphusjujubeMill.）属鼠李科枣属，其鲜果富含人体必需的多种矿物元素[1]，近年来，随着人们对鲜枣营养价值的重新认识及其极好的口味，市场需求增长迅速。但鲜枣采后果肉易腐烂褐变，不耐贮藏，大大缩短了鲜枣的货架期[2，3]。研究表明，大多果实成熟、极度软化等都与细胞壁酶系有关，是一系列酶相互作用的结果[4]。近年来，有关细胞壁酶对果实生长、成熟、衰老等的作用在苹果[5]、树莓[6]、梨[7]等方面的研究均有报道，且主要集中在Cx-cellulase、β-Gal、果胶甲酯酶（Pectinmethylesterase，PME）和多聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase，PG）等细胞壁酶对果实生长、成熟、衰老等的作用，而有关枣果实的研究鲜见报道。因此，本研究通过测定木枣果实不同生长时期细胞壁酶活性变化，从中找出其与木枣果实生长发育以及成熟软化的相关性，为枣果成熟、衰老的生理生化机理研究提供参考，也可为枣果实生物保鲜、延长货架期提供理论依据。1材料与方法1.1材料从陕西省延安市宝塔区张新庄村采摘大小均匀、无病虫害和无机械损伤的木枣果。采取成熟度为幼果期（8月6日）、青果期（8月21日）、泛红期（9月5日）、半红期（9月20日）、全红期（9月27日）、成熟期（10月4日）、完熟期（10月11日）的果实;清水洗净，当天液氮速冻带回，于-80℃冰箱中保存。1.2方法1.2.1样品的预处理从冰箱中随机抽取木枣果实10颗，于低温下去核、破碎、研磨，混匀备用。1.2.2粗酶液的制备参考黄志明等[8]的方法，取预处理过的样品1.0g加入5倍体积pH5.0的柠檬酸缓冲液，冰浴研磨，15000r/min离心20min，所得上清液即为粗酶液，用于酶活性测定。1.2.3酶活性的测定Cx-cellulase、β-Gal、PME和PG4种细胞壁酶的活性测定参考文献[8-11]的方法，分别测定OD540nm、OD400nm、OD520nm和OD274nm。其中Cx-cellulase酶活力以每分钟光密度变化1.0的酶量为1个酶活力单位，其余3种酶活力以每分钟光密度变化0.01的酶量为1个酶活力单位，均以U/g（FW）单位计。所有测定以煮沸5min的粗酶液为对照，试验均重复3次。2结果与分析2.1Cx-cellulase酶活性变化Cx-cellulase酶活性从木枣幼果期至完熟期基本呈平稳上升的趋势（图1），推测Cx-...