2种拮抗云杉梢枯病细菌的抑菌活性研究曹娜祝文博黄麒刘雪峰摘要：用平板对峙法研究贝莱斯芽胞杆菌（Bacillusvelezensis）和甲基营养型芽孢杆菌（B.methylotrophicus）对云杉梢枯病病原菌寄生小穴壳（Dothiorellagregaria）的抑菌活性，测定2种拮抗菌的生长曲线和不同培养时间、不同体积分数的发酵液抑菌活性及其稳定性，通过光学显微镜研究抑菌机理。结果表明，2种拮抗菌对云杉梢枯病病原菌均有较强的抑制作用，抑菌率分别为57.50%、56.67%。贝莱斯芽胞杆菌发酵液0～12h对病原菌菌丝体抑菌率几乎为0;24h抑菌率达到最大56.52%;24～72h，抑菌率处于43.48%～47.83%。甲基营养型芽孢杆菌发酵液0～12h对病原菌菌丝体抑菌率几乎为0;24h抑菌率达到最大52.17%;24～60h，抑菌率处于47.83%～52.17%;60～72h，抑菌率有所下降，抑菌率最低为43.48%。2种拮抗菌发酵液的抑菌活性随着体积分数的升高而上升。2种无菌滤液对温度不敏感，经不同酸碱度处理后抑菌活性下降。通过显微镜观察，2种拮抗菌发酵液能使病原菌菌丝发生变粗彭大、表面粗糙等形态变化。关键词：贝莱斯芽胞杆菌;甲基营养型芽孢杆菌;青海云杉;云杉梢枯病;抑菌活性：S763.15文献标识码：A：1006-8023（2021）03-0072-07Abstract：TheplateconfrontationmethodwasusedtostudytheantibacterialactivityofBacillusvelezensisandB.methylotrophicusagainstDothiorellagregaria，andthegrowcurveoftwokindsofantagonisticbacteriaandtheantibacterialactivityofdifferentincubationtimeanddifferentconcentrationweremeasured.andantibacterialmechanismwasstudiedbyopticalmicroscope.TheresultsshowedthattwokindsofantagonisticbacteriahadsignificantinhibitioneffectagainstD.gregariawiththeantibacterialrateof57.50%and56.67%，respectively.TheantibacterialrateofsterileculturefiltrateofB.velezensiswasnearly0from0to12h.Themaximumantibacterialratewas56.52%at24h，andtheantibacterialratewas43.48%-47.83%in24-72h.TheantibacterialrateofsterileculturefiltrateofB.methylotrophicuswasnearly0from0to12h.Themaximumantibacterialratewas52.17%at24h，andtheantibacterialratewas47.83%-52.17%in24-60h.In60-72h，theantibacterialratedecreased，andthelowestwas43.48%.Theantibacterialactivityoftwokindsofantagonisticbacteriasterileculturefiltrateincreasedwiththeincreaseofthevolumefraction.TwokindsofsterileculturefiltratewasnotsensitivetotemperatureandtheantibacterialactivitydecreasedafterdifferentpHtreatment.Underthemicroscope，twokindsofantagonisticbacteriasterileculturefiltratecanmakehyphaecoarsen，bentandenlarged.Keywords：Bacillusvelezensis;B.methylotrophicus;P.crassifoliaKom.;shootblightofPiceaasperataMast;antibacterialactivity0引言青海云杉（PiceacrassifoliaKom.）是松科（Pinaceae）云杉屬（Picea）的一种珍贵树种，为乔木，高度可达23m，是中国特有的树种，主要分布于我国祁连山区、青海、甘肃、宁夏以及内蒙古大青山等海拔1600～3800m的地带[1-5]。该树种木材性质与云杉相似，高大、通直，结构细致易加工，具有极高的观赏价值和经济价值，比如可供建筑、桥梁、家具及木纤维工业原料等用材。云杉梢枯病病原菌为寄生小穴壳（Dothiorellagregaria），主要侵染青海云杉的嫩梢，导致嫩梢枯死，严重情况会导致整株死亡，给我国青海云杉带来严重的经济损失。大多病害目前都处于物理防治和化学防治阶段，而化学防治长久使用会给环境造成极大的危害，为解决这一问题，寻找低毒或无毒的生物防治方法成为了大趋势[4-10]。生物防治具有无毒、无污染和无残留等优点，芽孢杆菌近年也越来越多地应用于对各种病害的防治中。贝莱斯芽胞杆菌（Bacillusvelezensis）和甲基营养型芽孢杆菌（B.methylotrophicus）是革兰氏阳性菌，杆状，能产生芽孢，能抑制多种病害，是理想的广谱生防菌[11-16]。张琼等[17]用贝莱斯芽胞杆菌防治棉花黄萎病，王蕊等[18]从有机质土壤中选育出一株甲基营...