抗红鳍东方皮肤溃烂病病原哈维弧菌单克隆抗体的制备及特性分析摘要以红鳍东方?皮肤溃烂病病原一一哈维弧菌2SYX002为抗原，通过杂交瘤技术制备了抗哈维弧的单抗1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、2E7、4A7、5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、4D12、2B9、7D6、6E6、1G2、6G6和2C1。特性分析结果表明：有8株单克隆抗体（1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、7D6、6E6、6G6）特异性较差，与试验中所有菌株均发生反应；有6株（4A7、4E12、7D7、8E10、4D12、2B9）只与免疫菌株哈维弧菌2SYX002反应，与其他菌株均不发生反应。5株单抗（2E7、5B2、1G2、2C1、1G3）与部分参考菌株有不同程度交叉反应；通过进一步特性分析，从中筛选出单克隆抗体2C1，其抗原包被浓度为5X107cells/mL时，与试验中所有哈维弧菌分离株反应均为阳性，除溶藻弧菌外不与其他参考菌株发生交叉反应，效价为1:256。本研究扩充了哈维弧菌单克隆抗体库，为哈维弧菌单克隆抗体的进一步应用提供参考数据。关键词哈维弧菌；红鰭东方?；单克隆抗体；特性分析中图分类号S941.4文献标识码A文章编号1007-5739(2016)08-0239-01AbstractInthispaper，6-week-oldBALB/cmicewereimmunizedwithVibrioharveyi2SYX002(isolatedfromdermalulcerofFugurubripes)formonoclonalantibodypreparation.Aftercellfusion，，screening,sub-cellclone，andsoon，19hybridomacelllineswereobtainedandnamed(1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、2E7、4A7、5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、4D12、2B9、7D6、6E6、1G2、6G6and2C1).ELISAresultsshowedthattheMAb1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、7D6、6E6and6G6hadpositivereactionwithallofthestandardandisolatedstrains.ThemAbof4A7、4E12>7D7、8E10、4D12and2B9hadnocrossreactionwithother11standardbacterialstrains，onlyspecificreactionwiththeimmunedbactria.MAb2E7、5B2,、1G2,、2C1and1G3hadcross-reactedwithtestedstrains，suchasVibrio.parahaemolyticus，Vibrio.damselaandsoon.Amongthem，MAb2C1onlyhadpositivereactionwithallstrainsofVibrio.harveyiandVibrio.alginolyticus(thetiterwas1:256),withoutother11standardbacterialstrains.ThepresentresultsprovidedthebasisforthepreparationofimmunochromatographicteststriptorapiddetectionVibrio,harveyi.KeywordsVibrioharveyi；Fugurubripes；monoclonalantibodies；characteristicanalysis.哈维弧菌(Vibrioharveyi)又称哈氏弧菌，广泛存在于海洋环境中，是海水养殖业中一种常见的致病菌其宿主十分广泛，是对虾发光病的主要致病菌［1-2］,还可引起多种海水养殖鱼类溃疡病［3-5］，其中红鰭东方?皮肤溃烂病，具有传染性较强，死亡率较高的特点。哈维弧菌是该病主要病原菌之一，患病鱼体出现表皮溃烂，伴随全身性出血，病灶处肌肉组织严重液化，肝脏等器官严重损伤，给养殖业带来严重的经济损失。由于哈维弧菌遗传特征和生理生化特征复杂多样，并且与其近缘种在表型上有很高的相似性，依靠传统的检测方法检出率低，而且需依赖专业的技术和设备，耗时长、操作复杂，难以实现对疾病的及时诊断与防治。因此，发展哈维弧菌的快速检测技术在致病性弧菌诊断中有重要意义。基于免疫学原理的荧光抗体技术及酶联免疫吸附技术可以实现快速、特异的检测哈维弧目前，Robertertson等制备了哈维弧菌的多克隆抗体［9］，但多抗血清具有明显的异质性，特异性较差。与之相比，单克隆抗体特异性高，其检测结果更准确可靠。本试验利用灭活的红鳍东方?“皮肤溃烂病”病原__哈维弧菌2SYX002作为抗原免疫小鼠，制备了抗哈维弧菌的单克隆抗体，并对其进行了特性分析，为哈维弧菌的快速检测技术的发展提供了物质基础。1材料与方法1.1试验材料及试剂哈维弧菌Vibrio.harveyi(ATCC35084)、灿烂弧菌Vibrio.splendidus(ATCC33125)、副溶血弧菌Vibrio.parahaemolyticus(KCTC2471)、溶藻弧Vibrio.alginolyticus(KCCM40513)、创伤弧Vibrio.vulnificus(ATCC2126)、美人鱼弧菌Vibrio.dams-ela(ATCC33539)、鳗弧Vibrio.anguillarum(KCTC2711)、希瓦氏菌Shewanellaoneidensis(KCCM41821)、河豚链球菌Streptococcu...