miR-506-3p靶向Beclin-1调控烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖机制研究

miR-506-3p靶向Beclin-1调控烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖机制研究史敏丁欣强郭晓波陈炜荧张明雨[摘要]目的:探討烧伤后皮肤成纤维细胞中miR-506-3p表达与Beclin-1的靶向关系及增殖调控作用,为烧伤后瘢痕的治疗提供新靶点。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测烧伤组织和热损伤皮肤成纤维细胞中miR-506-3p水平;Targetscan在线预测,双荧光素酶验证miR-506-3p与Beclin-1靶向关系;qRT-PCR和Westernblot检测miR-506-3p模拟物或抑制剂转染对Beclin-1表达的影响;qRT-PCR检测热刺激后miR-506-3p模拟物(10nM或30nM)转染成纤维细胞miR-506-3p的表达并采用CCK-8检测转染细胞增殖效率。结果:与正常组织相比,烧伤组织和热损伤成纤维细胞中miR-506-3p的表达下调;miR-506-3p和Beclin-1存在靶向调控作用关系,并且miR-506-3p可负调控Beclin-1表达;miR-506-3p模拟物转染以剂量依赖的方式抑制了热刺激的真皮成纤维细胞中的细胞增殖。结论:miR-506-3p通过靶向抑制Beclin-1表达来调节烧伤后皮肤成纤维细胞的自噬和增殖,有可能成为烧伤愈合后瘢痕治疗的潜在靶标。[关键词]miR-506-3p;Beclin-1;成纤维细胞;自噬;增殖;烧伤[]R644[文献标志码]A[]1008-6455(2021)08-0095-04miR-506-3pTargetsBeclin-1toRegulateAutophagyandProliferationofPost-burnSkinFibroblastsSHIMin1,DINGXin-qiang2,GUOXiao-bo3,CHENWei-ying1,ZHANGMing-yu1(1.MedicalSchoolofXianPeihuaUniversity,Xian710125,Shaanxi,China;2.DepartmentofDermatological,Xi'anChildren'sHospital,Xian710003,Shaanxi,China;3.ClinicalLaboratory,Xi'anCentralHospital,Xian710004,Shaanxi,China)Abstract:ObjectiveToexplorethetargetingrelationshipbetweentheexpressionofmiR-506-3pandBeclin-1inheat-damagedskinfibroblastsanditsproliferationregulationeffectonBeclin-1,inordertoprovideanewtargetforthetreatmentofpost-burnscars.MethodsWeusedqRT-PCRtodetectmiR-506-3pofpost-burntissueandheat-damagedskinfibroblasts,usedTargetscanonlinepredictionanddualluciferasetoverifythetargetingrelationshipbetweenmiR-506-3pandBeclin-1.WeusedqRT-PCRandWesternblottodetecttheeffectofmiR-506-3pmimicorinhibitortransfectiononBeclin-1expression.TheexpressionofmiR-506-3pinfibroblaststransfectedwithmiR-506-3pmimic(10nMor30nM)afterthermalstimulationwasdetectedbyqRT-PCRandtheproliferationefficiencyoftransfectedcellswasdetectedbyCCK-8.ResultsComparedwithnormaltissues,theexpressionofmiR-506-3pinpost-burntissuesandheat-damagedfibroblastsisdown-regulated.ThereisatargetedregulationrelationshipbetweenmiR-506-3pandBeclin-1,andmiR-506-3pcannegativelyregulatetheexpressionofBeclin-1,andmiR-506-3pmimictransfectioninhibitscellproliferationinheat-stimulateddermalfibroblastsinadose-dependentmanner.ConclusionMiR-506-3pregulatestheautophagyandproliferationofpost-burnskinfibroblastsbytargetingtheexpressionofBeclin-1,andmaybeapotentialtargetonscarforpost-burnhealing.Keywords:miR-506-3p;Beclin-1;fibroblasts;autophagy;proliferation;burn烧伤皮肤愈合后转化为纤维瘢痕组织,主要特征为成纤维细胞过度增殖及细胞外基质聚集[1]。瘢痕的形成严重影响患者身心健康,因而研究瘢痕发生机制中的基因治疗靶点具有重要意义。大量文献表明,自噬可降解异常细胞蛋白聚集体和受损细胞器的分解代谢途径,在生物体稳态维持中发挥着重要作用[2]。自噬水平异常可导致多种疾病发生,Beclin-1是至关重要的促自噬蛋白,然而很多因素可影响Beclin-1表达,其中就包括微小RNA(miRNA),如Chen等发现miR-30a通过靶向Beclin-1来调节癌细胞的自噬[3],miR-30a通过下调Beclin-1表达来降低肝星形细胞的自噬活性[4]。本课题组前期研究也证实,热损伤成纤维细胞具有miR-506-3p表达下调和自噬水平上调(LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Atg5表达显著上调,而p62表达下调)...

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